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試驗過程中,生物樣本可能是zui敏感的,,因為它們的活性和特性依賴于合適的試驗操作和貯藏條件,。實驗室菌種的處理和保藏的程序應(yīng)標準化,使盡可能減少菌種污染和生長特性的改變,。按統(tǒng)一操作程序制備的菌株是微生物試驗結(jié)果一致性的重要保證,。
(一)菌種保藏的重要性
菌種保藏是微生物學檢驗工作中的一項常規(guī)技術(shù),菌種的科學保藏和管理直接關(guān)系到檢驗結(jié)果的正確性,。
(二)菌種的來源
藥品微生物檢驗用的試驗菌應(yīng)來自認可的國內(nèi)或國外菌種收藏機構(gòu)的標準菌株,,或使用與標準菌株所有相關(guān)特性等效的商業(yè)派生菌株。
(三)菌種保藏的中心任務(wù)
⒈廣泛收集各種有用的微生物菌種,。
⒉選擇zui適宜的保藏方法,。
⒊研究、檢驗,、交換和使用,。
(四)菌種保藏的原則
⒈根據(jù)微生物菌種的生理、生化特性,,在人工創(chuàng)造的條件下盡量降低微生物細胞的代謝強度,,使細胞基本上處于休眠狀態(tài),生長繁殖受到抑制但不至于死亡,,以減低菌種的變異率,。
2.標準菌株的復(fù)活或培養(yǎng)物的制備應(yīng)按供應(yīng)商提供的說明或按驗證的方法進行。
3.標準儲備菌株-從國內(nèi),、外菌種收藏機構(gòu)獲得的標準菌株經(jīng)復(fù)活并在適宜的培養(yǎng)基中生長后,既為標準儲備菌株,。
4.低溫、干燥,、缺氧,、缺乏營養(yǎng)等環(huán)境條件都可以抑制微生物的代謝和生長繁殖,因此低溫,、干燥和真空是菌種保藏的重要手段,。
5.標準儲備菌株經(jīng)純度和特性確認后保存時,可將培養(yǎng)物等份懸浮于抗冷凍的培養(yǎng)基中,,并分裝于小瓶中,建議采用低溫冷凍干燥,,液氮儲存,超低溫冷凍(低于-70℃)等方法保存,。
6.低于-70℃或低溫冷凍干燥可以延長菌種的保存時間.標準儲備菌株可用于制備每月或每周一次轉(zhuǎn)種的工作菌株,。
7.冷凍菌株一旦解凍轉(zhuǎn)種制備工作菌株后,不得重新冷凍或再次使用,。
8.工作菌株不可代替標準菌株,標準菌株的商業(yè)衍生物僅可用作工作菌株,。
9.不同的微生物,,應(yīng)根據(jù)其生物特征來選擇zui適宜的保藏方法,菌種的保藏方法一般分四個階段:
⑴ 挑選特征典型的純菌菌落,。
⑵確定保藏的合適菌體,。
⑶選擇zui適宜的方法保藏。
⑷定期對保藏的菌種進行檢查,。
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