人小細胞肺癌細胞NCI-H196操作法
1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)條件：RPMI1640培養(yǎng)基；10%胎牛血清,；1%雙抗

常溫細胞收貨當天處理方式

1.收到常溫細胞后,，及時拍照記錄有無漏液/瓶身破損現(xiàn)象。

2. 鏡下觀察有無微生物污染現(xiàn)象,，拍照記錄不同倍數(shù)鏡下細胞狀態(tài)和有無染菌現(xiàn)象,， 方便后續(xù)售后處理。

3. 消毒后,，更換贈送的培養(yǎng)液放置培養(yǎng)箱靜止2-3小時,。如細胞有多數(shù)懸浮細胞需要離心收集重新接種止培養(yǎng)瓶。

4. 觀察細胞密度若超過 80%則可正常傳代處理(有的原代細胞不可傳代,，請根據(jù)實際情況決定),，傳代推薦比例 1：2 到 1：3（按實際收貨細胞密度決定，若不確定 可聯(lián)系技術(shù)支持）,；若細胞密度不到 80%則可繼續(xù)培養(yǎng),，注意擰松瓶蓋或更換透氣瓶蓋；懸浮細胞注意離心所有培養(yǎng)基以收集細胞,。

5. 由于氣溫,，運輸?shù)扔绊懺斐少N壁細胞漂浮的，請將細胞離心收集后在離心管中消化后進行傳代（參考附件）,，或及時聯(lián)系技術(shù)支持進行指導傳代。

貼壁細胞傳代：1.從培養(yǎng)容器中吸出用過的細胞培養(yǎng)基并丟棄,；

2.從與貼壁細胞層相對的容器一側(cè)輕輕加入沖洗液以避免攪動細胞層,，前后搖晃容器數(shù)次

3. 從培養(yǎng)容器中吸出沖洗液并丟棄，向培養(yǎng)瓶中加入預熱的胰酶,；胰酶量應足以覆蓋細胞層(T25為1ml),；

4.將培養(yǎng)容器在室溫下孵育約 2分鐘（請注意實際孵育時間根據(jù)所用細胞系不同而有所差異）；

5.在顯微鏡下觀察細胞解離情況,；如果解離程度未達 90%,，可將孵育時間延長幾分鐘，每 30 秒鐘檢查一次解離情況,；

6.細胞解離程度大于等于 90%時,，傾斜培養(yǎng)容器，使細胞上液體盡快流盡,；加入所用解離劑兩倍體積的預熱生長培養(yǎng)基,；吹打細胞層表面數(shù)次,，使培養(yǎng)基分散；

7.將細胞轉(zhuǎn)移到15mL 無菌離心管中,，以 200×g 的離心力離心 3-5 分鐘（請注意離心速度和時間依細胞種類不同而有所差異）,；

8.用最少體積的預熱生長培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將細胞懸液按照推薦比例稀釋,，并將適量體積的細胞懸液轉(zhuǎn)移到新的細胞培養(yǎng)容器中,，把細胞放回培養(yǎng)箱（注：如果使用培養(yǎng)瓶，將其放入培養(yǎng)箱前應將瓶蓋旋松,，以便進行充分的氣體交換,，除非您使用的是通氣式培養(yǎng)瓶和透氣性瓶蓋）。

懸浮細胞傳代：將 T25 培養(yǎng)瓶中的懸液收集至離心管中 1000rpm 離心 5min,，收集上清,，加 1-2ml 培養(yǎng)基重懸，按 1:2 比例進行比例傳代分到新T25瓶中,，補充5-8ml/瓶新的培養(yǎng)基 ,，最后放入細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

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