DT40細胞,，雞淋巴瘤細胞培養(yǎng)方法 簡介：
種屬：雞
又稱：DT-40; DT 40; DT40B; LSCC-DT40

組織來源：法氏囊

疾病：淋巴瘤

傳代比列/細胞消化：1:2傳代

培養(yǎng)條件：DMEM養(yǎng)基,；10%胎牛血清,；5%雞血清； 0.05mMβ-巰基乙醇,； 1%雙抗

介紹：DT40是來自Hyline SC雞法氏囊淋巴細胞株經(jīng)鳥類白血病病毒誘導(dǎo)建株的,。原始淋巴瘤用羅氏相關(guān)病毒1(RAV-1)感染出生１天的小雞得到。法氏囊中生成的腫瘤制成細胞懸液后通過靜脈注射輸入同基因型的受體小雞,。經(jīng)過一次體內(nèi)移植后,，建立了DT40細胞株。 這株細胞包含的前病毒基因整合在c-myc原癌基因的上游,，表達的c-myc RNA水平較高,。它缺少一個正常c-myc基因，但含有兩個拷貝ALV去調(diào)控的myc基因,。這株細胞保留了重排免疫球蛋白輕鏈基因(IgL)的能力,。 在IgL位點，DT40包含一個重排和一個胚系同源基因,。c-rel基因和v-rel癌基因在DT40細株中都能誘導(dǎo)組織相容性(MHC)II類抗原表達,。v-rel 誘導(dǎo)的MHCII表達比c-rel誘導(dǎo)快，且其有效性在數(shù)周后達到c-rel的50倍,。這株細胞呈淋巴母細胞表型,。傳染性檢測表明DT40釋放低水平的傳染性RAV-1。這株細胞可以用于穩(wěn)轉(zhuǎn)研究,。

形態(tài)：淋巴母細胞樣

倍增時間

培養(yǎng)條件

凍存條件

懸浮生長

~48h

氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%,。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

凍存液：90%FBS,，DMSO 10%,

或使用非程序凍存液

保藏機構(gòu)

備注ATCC; CRL-2111

該細胞為懸浮細胞，請注意離心收集細胞懸液,，請勿直接倒掉細胞培養(yǎng)液,。

僅限于科學(xué)研究，不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用。

產(chǎn)品使用

細胞接收處理流程：

1：觀察有無破損漏液情況,，如有請拍照及時聯(lián)系客服。

2：酒精消毒培養(yǎng)瓶表面后顯微鏡下觀察細胞狀態(tài),，觀察拍照后不用打開培養(yǎng)瓶蓋 放入培養(yǎng)箱靜

止2-3小時穩(wěn)定 細胞狀態(tài),。

3：請按照細胞操作指南進行第一次傳代凍存處理。

4：產(chǎn)品隨貨會附帶細胞說明書,、細胞培養(yǎng)操作指南,、細胞鑒定、支原體檢測報告,。

5：若產(chǎn)品有異?；蚱渌蓡枺呻S時聯(lián)系客服,；轉(zhuǎn)至技術(shù)支持,。

 DT40細胞，雞淋巴瘤細胞培養(yǎng)方法

常溫細胞收貨當天處理方式

1.收到常溫細胞后,，及時拍照記錄有無漏液/瓶身破損現(xiàn)象,。

2. 鏡下觀察有無微生物污染現(xiàn)象，拍照記錄不同倍數(shù)鏡下細胞狀態(tài)和有無染菌現(xiàn)象,， 方便后續(xù)售后處理,。

3. 消毒后，更換贈送的培養(yǎng)液放置培養(yǎng)箱靜止2-3小時,。如細胞有多數(shù)懸浮細胞需要離心收集重新接種止培養(yǎng)瓶,。

4. 觀察細胞密度若超過 80%則可正常傳代處理(有的原代細胞不可傳代，請根據(jù)實際情況決定),，傳代推薦比例 1：2 到 1：3（按實際收貨細胞密度決定,，若不確定 可聯(lián)系技術(shù)支持）；若細胞密度不到 80%則可繼續(xù)培養(yǎng),，注意擰松瓶蓋或更換透氣瓶蓋,；懸浮細胞注意離心所有培養(yǎng)基以收集細胞。

5. 由于氣溫,，運輸?shù)扔绊懺斐少N壁細胞漂浮的,，請將細胞離心收集后在離心管中消化后進行傳代（參考附件），或及時聯(lián)系技術(shù)支持進行指導(dǎo)傳代,。貼壁細胞傳代：1.從培養(yǎng)容器中吸出用過的細胞培養(yǎng)基并丟棄,；

2.從與貼壁細胞層相對的容器一側(cè)輕輕加入沖洗液以避免攪動細胞層，前后搖晃容器數(shù)次

3. 從培養(yǎng)容器中吸出沖洗液并丟棄,，向培養(yǎng)瓶中加入預(yù)熱的胰酶,；胰酶量應(yīng)足以覆蓋細胞層(T25為1ml)；

4.將培養(yǎng)容器在室溫下孵育約 2分鐘（請注意實際孵育時間根據(jù)所用細胞系不同而有所差異）；

5.在顯微鏡下觀察細胞解離情況,；如果解離程度未達 90%,，可將孵育時間延長幾分鐘，每 30 秒鐘檢查一次解離情況,；

6.細胞解離程度大于等于 90%時,，傾斜培養(yǎng)容器，使細胞上液體盡快流盡,；加入所用解離劑兩倍體積的預(yù)熱生長培養(yǎng)基,；吹打細胞層表面數(shù)次，使培養(yǎng)基分散,；

7.將細胞轉(zhuǎn)移到15mL 無菌離心管中,，以 200×g 的離心力離心 3-5 分鐘（請注意離心速度和時間依細胞種類不同而有所差異）；

8.用最少體積的預(yù)熱生長培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀,，將細胞懸液按照推薦比例稀釋,，并將適量體積的細胞懸液轉(zhuǎn)移到新的細胞培養(yǎng)容器中，把細胞放回培養(yǎng)箱（注：如果使用培養(yǎng)瓶,，將其放入培養(yǎng)箱前應(yīng)將瓶蓋旋松,，以便進行充分的氣體交換，除非您使用的是通氣式培養(yǎng)瓶和透氣性瓶蓋）,。

懸浮細胞傳代：將 T25 培養(yǎng)瓶中的懸液收集至離心管中 1000rpm 離心 5min,，收集上清，加 1-2ml 培養(yǎng)基重懸,，按 1:2 比例進行比例傳代分到新T25瓶中,，補充5-8ml/瓶新的培養(yǎng)基 ，最后放入細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。