DT40細(xì)胞,，雞淋巴瘤細(xì)胞培養(yǎng)方法 簡(jiǎn)介：
種屬：雞
又稱：DT-40; DT 40; DT40B; LSCC-DT40

組織來(lái)源：法氏囊

疾病：淋巴瘤

傳代比列/細(xì)胞消化：1:2傳代

培養(yǎng)條件：DMEM養(yǎng)基,；10%胎牛血清,；5%雞血清； 0.05mMβ-巰基乙醇,； 1%雙抗

介紹：DT40是來(lái)自Hyline SC雞法氏囊淋巴細(xì)胞株經(jīng)鳥(niǎo)類(lèi)白血病病毒誘導(dǎo)建株的,。原始淋巴瘤用羅氏相關(guān)病毒1(RAV-1)感染出生１天的小雞得到。法氏囊中生成的腫瘤制成細(xì)胞懸液后通過(guò)靜脈注射輸入同基因型的受體小雞,。經(jīng)過(guò)一次體內(nèi)移植后,，建立了DT40細(xì)胞株。 這株細(xì)胞包含的前病毒基因整合在c-myc原癌基因的上游,，表達(dá)的c-myc RNA水平較高,。它缺少一個(gè)正常c-myc基因，但含有兩個(gè)拷貝ALV去調(diào)控的myc基因,。這株細(xì)胞保留了重排免疫球蛋白輕鏈基因(IgL)的能力,。 在IgL位點(diǎn),，DT40包含一個(gè)重排和一個(gè)胚系同源基因。c-rel基因和v-rel癌基因在DT40細(xì)株中都能誘導(dǎo)組織相容性(MHC)II類(lèi)抗原表達(dá),。v-rel 誘導(dǎo)的MHCII表達(dá)比c-rel誘導(dǎo)快,，且其有效性在數(shù)周后達(dá)到c-rel的50倍。這株細(xì)胞呈淋巴母細(xì)胞表型,。傳染性檢測(cè)表明DT40釋放低水平的傳染性RAV-1,。這株細(xì)胞可以用于穩(wěn)轉(zhuǎn)研究。

形態(tài)：淋巴母細(xì)胞樣

倍增時(shí)間

培養(yǎng)條件

凍存條件

懸浮生長(zhǎng)

~48h

氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

凍存液：90%FBS,，DMSO 10%,

或使用非程序凍存液

保藏機(jī)構(gòu)

備注ATCC; CRL-2111

該細(xì)胞為懸浮細(xì)胞,，請(qǐng)注意離心收集細(xì)胞懸液，請(qǐng)勿直接倒掉細(xì)胞培養(yǎng)液,。

僅限于科學(xué)研究,，不可作為動(dòng)物或人類(lèi)疾病的治療產(chǎn)品使用。

產(chǎn)品使用

細(xì)胞接收處理流程：

1：觀察有無(wú)破損漏液情況,，如有請(qǐng)拍照及時(shí)聯(lián)系客服,。

2：酒精消毒培養(yǎng)瓶表面后顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)，觀察拍照后不用打開(kāi)培養(yǎng)瓶蓋 放入培養(yǎng)箱靜

止2-3小時(shí)穩(wěn)定 細(xì)胞狀態(tài),。

3：請(qǐng)按照細(xì)胞操作指南進(jìn)行第一次傳代凍存處理,。

4：產(chǎn)品隨貨會(huì)附帶細(xì)胞說(shuō)明書(shū)、細(xì)胞培養(yǎng)操作指南,、細(xì)胞鑒定,、支原體檢測(cè)報(bào)告。

5：若產(chǎn)品有異?；蚱渌蓡?wèn),，可隨時(shí)聯(lián)系客服；轉(zhuǎn)至技術(shù)支持,。

 DT40細(xì)胞,，雞淋巴瘤細(xì)胞培養(yǎng)方法

常溫細(xì)胞收貨當(dāng)天處理方式

1.收到常溫細(xì)胞后，及時(shí)拍照記錄有無(wú)漏液/瓶身破損現(xiàn)象,。

2. 鏡下觀察有無(wú)微生物污染現(xiàn)象,，拍照記錄不同倍數(shù)鏡下細(xì)胞狀態(tài)和有無(wú)染菌現(xiàn)象， 方便后續(xù)售后處理。

3. 消毒后,，更換贈(zèng)送的培養(yǎng)液放置培養(yǎng)箱靜止2-3小時(shí),。如細(xì)胞有多數(shù)懸浮細(xì)胞需要離心收集重新接種止培養(yǎng)瓶。

4. 觀察細(xì)胞密度若超過(guò) 80%則可正常傳代處理(有的原代細(xì)胞不可傳代,，請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況決定),，傳代推薦比例 1：2 到 1：3（按實(shí)際收貨細(xì)胞密度決定，若不確定 可聯(lián)系技術(shù)支持）,；若細(xì)胞密度不到 80%則可繼續(xù)培養(yǎng)，注意擰松瓶蓋或更換透氣瓶蓋,；懸浮細(xì)胞注意離心所有培養(yǎng)基以收集細(xì)胞,。

5. 由于氣溫，運(yùn)輸?shù)扔绊懺斐少N壁細(xì)胞漂浮的,，請(qǐng)將細(xì)胞離心收集后在離心管中消化后進(jìn)行傳代（參考附件）,，或及時(shí)聯(lián)系技術(shù)支持進(jìn)行指導(dǎo)傳代。貼壁細(xì)胞傳代：1.從培養(yǎng)容器中吸出用過(guò)的細(xì)胞培養(yǎng)基并丟棄,；

2.從與貼壁細(xì)胞層相對(duì)的容器一側(cè)輕輕加入沖洗液以避免攪動(dòng)細(xì)胞層,，前后搖晃容器數(shù)次

3. 從培養(yǎng)容器中吸出沖洗液并丟棄，向培養(yǎng)瓶中加入預(yù)熱的胰酶,；胰酶量應(yīng)足以覆蓋細(xì)胞層(T25為1ml),；

4.將培養(yǎng)容器在室溫下孵育約 2分鐘（請(qǐng)注意實(shí)際孵育時(shí)間根據(jù)所用細(xì)胞系不同而有所差異）；

5.在顯微鏡下觀察細(xì)胞解離情況,；如果解離程度未達(dá) 90%,，可將孵育時(shí)間延長(zhǎng)幾分鐘，每 30 秒鐘檢查一次解離情況,；

6.細(xì)胞解離程度大于等于 90%時(shí),，傾斜培養(yǎng)容器，使細(xì)胞上液體盡快流盡,；加入所用解離劑兩倍體積的預(yù)熱生長(zhǎng)培養(yǎng)基,；吹打細(xì)胞層表面數(shù)次，使培養(yǎng)基分散,；

7.將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到15mL 無(wú)菌離心管中,，以 200×g 的離心力離心 3-5 分鐘（請(qǐng)注意離心速度和時(shí)間依細(xì)胞種類(lèi)不同而有所差異）；

8.用最少體積的預(yù)熱生長(zhǎng)培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀,，將細(xì)胞懸液按照推薦比例稀釋,，并將適量體積的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的細(xì)胞培養(yǎng)容器中，把細(xì)胞放回培養(yǎng)箱（注：如果使用培養(yǎng)瓶,，將其放入培養(yǎng)箱前應(yīng)將瓶蓋旋松,，以便進(jìn)行充分的氣體交換，除非您使用的是通氣式培養(yǎng)瓶和透氣性瓶蓋）。

懸浮細(xì)胞傳代：將 T25 培養(yǎng)瓶中的懸液收集至離心管中 1000rpm 離心 5min,，收集上清,，加 1-2ml 培養(yǎng)基重懸，按 1:2 比例進(jìn)行比例傳代分到新T25瓶中,，補(bǔ)充5-8ml/瓶新的培養(yǎng)基 ,，最后放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。