猴腺病毒抗體(ADV Ab)elisa檢測試劑盒
腺病毒抗體試劑盒用于測定猴血清，血漿及相關(guān)液體樣本中腺病毒抗體(ADV Ab)的表達(dá),。
實(shí)驗(yàn)原理：
    本試劑盒采用雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法(ELISA )測定標(biāo)本中猴腺病毒抗體(ADV Ab),。用純
化的猴腺病毒抗原包被微孔板，制成固相抗原,，可與樣品中腺病毒抗體(ADV Ab)相結(jié)合,，經(jīng)
洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與 HRP 標(biāo)記的腺病毒抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-抗
原復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB顯色,。TMB在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在
酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD值),，與CUTOFF
值相比較，從而判定標(biāo)本中猴腺病毒抗體(ADV Ab)的存在與否,。
腺病毒抗體試劑盒組成：
試劑盒組成 48孔配置 96孔配置 保存
說明書 1 份 1 份
封板膜 2 片(48) 2 片(96)
密封袋 1 個 1 個
酶標(biāo)包被板 1×48 1×96 2-8℃保存
陰性對照 0.5ml×1 瓶 0.5ml×1 瓶 2-8℃保存
陽性對照 0.5ml×1 瓶 0.5ml×1 瓶 2-8℃保存
酶標(biāo)試劑 3 ml ×1 瓶 6 ml ×1 瓶 2-8℃保存
樣品稀釋液 3 ml ×1 瓶 6 ml ×1 瓶 2-8℃保存
顯色劑A 液 3 ml ×1 瓶 6 ml ×1 瓶 2-8℃保存
顯色劑B 液 3 ml ×1 瓶 6 ml ×1 瓶 2-8℃保存
終止液 3ml ×1 瓶 6ml ×1 瓶 2-8℃保存
濃縮洗滌液 (20ml×20倍)×1 瓶 (20ml×30倍)×1 瓶 2-8℃保存
腺病毒抗體樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘，離心 20分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上
清,，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心,。
2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,，混合 10-20 分鐘后，離心
20分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次
離心,。
3. 尿液：用無菌管收集,，離心 20分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,，保存過程
中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。胸腹水,、腦脊液參照實(shí)行,。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集,。離心 20分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/
分),。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,，用PBS (PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,，細(xì)胞
濃度達(dá)到100 萬/ml 左右。通過反復(fù)凍融,，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心 20分
2
鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。
5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量,。加入一定量的PBS ,，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)?br />用,。標(biāo)本融化后仍然保持 2-8℃的溫度,。加入一定量的 PBS (PH7.4)，用手工或勻漿器
將標(biāo)本勻漿充分,。離心 20分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待
檢測,，其余冷凍備用,。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能馬上
進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP )活性。
腺病毒抗體操作步驟：
1. 編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號,，每板應(yīng)設(shè)陰性對照 2 孔,、陽性對照 2 孔、空白對照 1
孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同)
2. 加樣：分別在陰,、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl ,。然后在待測樣品孔先
加樣品稀釋液 40μl ,，然后再加待測樣品 10μl 。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不
觸及孔壁,，輕輕晃動混勻，
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育30 分鐘,。    
4. 配液：將30(48T 的20倍)倍濃縮洗滌液加蒸餾水至 600ml 后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置 30秒后棄去,，如此
重復(fù)5 次，拍干,。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl ,，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3,。
8. 洗滌：操作同 5,。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A 50 μl ，再加入顯色劑 B 50 μl ,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色
15分鐘
10. 終止：每孔加終止液 50μl ，終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色),。
11. 測定：以空白空調(diào)零,，450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止
液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。
結(jié)果判定：
試驗(yàn)有效性：陽性對照孔平均值≥1.00;  陰性對照平均值≤0.10
    臨界值(CUT OFF)計(jì)算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
    陰性判定：樣品 OD值< 臨界值(CUT OFF)者為腺病毒抗體(ADV Ab)陰性
    陽性判定：樣品 OD值≥ 臨界值(CUT OFF)者為腺病毒抗體(ADV Ab)陽性
腺病毒抗體注意事項(xiàng)
1．操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行,，本試劑不同批號組分不得混用。
2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未
用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
3．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果,。
4．封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。
5．底物請避光保存,。
6．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),，使用雙波長檢測時，參考波長為 630nm
7．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。終止液為 2M 的流酸，使用時必須
注意安全,。
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保存條件及有效期
1．試劑盒保存：,；2-8℃。
2．有效期：6 個月