猴腺病毒抗體(ADV Ab)elisa檢測試劑盒
腺病毒抗體試劑盒用于測定猴血清,，血漿及相關(guān)液體樣本中腺病毒抗體 (ADV Ab)的含量。
實(shí)驗(yàn)原理：
本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測定標(biāo)本中猴腺病毒抗體 (ADV? Ab )水平,。用純化的猴腺
病毒 (ADV)抗原包被微孔板,，制成固相抗原，往包被抗原的微孔中依次加入腺病毒抗體
(ADV Ab),，再與 HRP 標(biāo)記的腺病毒 (ADV)抗原結(jié)合,，形成抗原-抗體-抗原復(fù)合物，經(jīng)
過*洗滌后加底物 TMB顯色,。TMB在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)
化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的腺病毒抗體 (ADV? Ab )呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在
450nm 波長下測定吸光度(OD值),，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中猴腺病毒抗體 (ADV? Ab )
濃度。
腺病毒抗體試劑盒組成：
試劑盒組成 48孔配置 96孔配置 保存
說明書 1 份 1 份
封板膜 2 片(48) 2 片(96)
密封袋 1 個(gè) 1 個(gè)
酶標(biāo)包被板 1×48 1×96 2-8℃保存
標(biāo)準(zhǔn)品：135ng/L 0.5ml×1 瓶 0.5ml×1 瓶 2-8℃保存
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶 1.5ml×1 瓶 2-8℃保存
酶標(biāo)試劑 3 ml ×1 瓶 6 ml ×1 瓶 2-8℃保存
樣品稀釋液 3 ml ×1 瓶 6 ml ×1 瓶 2-8℃保存
顯色劑A 液 3 ml ×1 瓶 6 ml ×1 瓶 2-8℃保存
顯色劑B 液 3 ml ×1 瓶 6 ml ×1 瓶 2-8℃保存
終止液 3ml ×1 瓶 6ml ×1 瓶 2-8℃保存
20倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 30ml×1 瓶 2-8℃保存
腺病毒抗體樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘,，離心 20分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上
清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀,，應(yīng)再次離心,。
2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,，混合 10-20 分鐘后，離心
20分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次
離心,。
3. 尿液：用無菌管收集,，離心 20分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,，保存過程
中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。胸腹水,、腦脊液參照實(shí)行,。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集,。離心 20分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/
分),。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),，用PBS (PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,，細(xì)胞
濃度達(dá)到100 萬/ml 左右。通過反復(fù)凍融,，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心 20分
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鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。
5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后,，稱取重量,。加入一定量的PBS ，PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)?br />用,。標(biāo)本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS (PH7.4),，用手工或勻漿器
將標(biāo)本勻漿充分,。離心 20分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,。分裝后一份待
檢測,，其余冷凍備用。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能馬上
進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP )活性,。
腺病毒抗體操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔 10孔,，在*、第二孔中分別加標(biāo)
準(zhǔn)品100μl,，然后在*,、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl，混勻,；然后從*孔,、第二
孔中各取100μl 分別加到第三孔和第四孔，再在第三,、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,，
混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 棄掉,，再各取 50μl 分別加到第五,、第六孔
中，再在第五,、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul ,，混勻；混勻后從第五,、第六孔中各
取50μl 分別加到第七,、第八孔中，再在第七,、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl,，混
勻后從第七、第八孔中分別取 50μl 加到第九,、第十孔中,，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)
品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取 50μl 棄掉,。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,，
濃度分別為 90ng/L ，60ng/L? ,，30ng/L ,，15ng/L ，7.5ng/L )。
2. 加樣：分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同),、待測樣
品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品 10μl(樣
品zui終稀釋度為 5 倍),。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混
勻,。
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育30 分鐘。
4. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20倍稀釋后備用,。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置 30秒后棄去，如此
重復(fù)5 次,，拍干,。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外,。
7. 溫育：操作同 3,。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50 μl,，再加入顯色劑 B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50μl,，終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色),。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD值),。 測定應(yīng)在加終止
液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。
腺病毒抗體注意事項(xiàng)：
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未
用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,，洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,，以避免試驗(yàn)誤差,。一次加樣時(shí)間
控制在5 分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。
4．請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值
大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD值),，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,，計(jì)
算時(shí)請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5．封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。
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6．底物請避光保存。
7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
9．本試劑不同批號組分不得混用,。
10.? 如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn),。
計(jì)算：
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),，OD值為縱坐標(biāo)，
在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,，根據(jù)樣品的 OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋

倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,，將樣品的 OD值代入方程式,，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實(shí)際濃度1. 樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù) R 值為0.990以上,。
2. 批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于 9%和11%?保存條件及有效期：
1. 試劑盒保存：；2-8℃,。
2．有效期：6 個(gè)月