產品名稱:小鼠血管緊張素原(aGT)ELISA試劑盒
英文名稱:Mouse angiotensinogen,aGT ELISAKit
酶聯免疫吸附試驗
①直接法 該方法直接利用抗原 與酶聯抗體的結合,,較簡單易行。A.假抗原,。在聚苯乙烯酶標版的孔穴中加入待檢測的抗原(捕食者胃內含物抽提液)0.2mL,,在4℃冰箱中過夜,使抗原黏附于塑料孔壁上,。B.洗滌兩次,,倒置于干毛巾上,使孔穴中的液體盡量流出,。c.加酶聯抗體,。 各孔穴中加入酶聯抗體0.2mL,在mL37℃下孵育3h,,使其充分結合,。d. 加底物。 用PBS充分洗滌以除去未結合的酶聯抗體,,然后加入底物(鄰苯二胺)0.2 mL,,于37℃反應30min,用2mol/L硫酸0.05 mL終止反應,。e. 用ELISA檢測儀測定其吸光度值,,分別設陽性、陰性和空白對照,,以確定陽性反應臨界值,。
②雙抗體夾心法 該方法與直接法的不同在于吸附抗體。a. 包被抗體。酶標板的孔穴中加入0.2 mL抗體(用PH=9.6/0.05mol/L碳酸鹽緩沖液稀釋),,置37℃水浴中孵育3h,移入4℃冰箱過夜,。將各孔中多余的抗體傾去,加入PBS洗滌,,立即甩去,,再將PBS加滿各板孔,置5min,甩去溶液,,如此洗滌2次,,倒置于干毛巾上,使孔穴中的液體盡量流出,。b. 加待檢抗原,。沒孔中加入待檢捕食者胃內含物抽提液0.2 mL.同時設陽性、陰性和空白(PBS)對照,,37℃水溶中孵育3h,,轉入冰箱中過夜。如上法洗滌3次,。C. 加入酶聯抗體,。每孔加入酶聯抗體0.2 mL,37℃水浴孵育2h,,如上法洗滌3次,。d. 加底物。 每孔加入底物鄰苯二胺0.2 mL, 37℃水浴孵育1h,加入2mol/L硫酸0.05,,以終止反應,。e. 用 ELISA檢測儀測定其吸光度值。
③間接法 與前兩種方法不同點在于酶聯抗體與抗原的間接結合,。a. 每孔加入待檢抗原0.2 mL ,,4℃冰箱中過夜,使抗原黏附于塑料孔壁上,。并依上法洗滌3次,。b. 每孔加0.2 mL,用PBS稀釋的抗體,37℃孵育2-3h,。c.用PBS洗滌3次后,,加入溶于PBS的酶聯抗體0.2mL,37℃孵育2-3h,。d. 加底物,,方法同上。e. 用ELISA檢測.
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