Rosetta(DE3)感受態(tài)細(xì)胞說明書

Rosetta(DE3) Competent Cell

Rosetta(DE3)感受態(tài)細(xì)胞

目錄號：YJ0811

保存條件：-80℃保存,。

組分說明

               Cat. No.                              YJ0811A

               Size                                   10×100 μl

               Rosetta (DE3) Competent Cell           10×100 μl

               Control DNA pUC19,，0.1 ng/μl              10 μl

產(chǎn)品簡介

　　本產(chǎn)品是采用進(jìn)口Rosetta菌株,，經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞,，可用于DNA

的熱擊轉(zhuǎn)化,。Rosetta菌株是攜帶氯霉素抗性質(zhì)粒BL21的衍生菌,，補(bǔ)充大腸桿菌缺乏的

6種稀有密碼子（ AUA,，AGG，AGA,，CUA,，CCC，GGA）對應(yīng)的tRNA,，提高外源

基因,，尤其是真核基因在原核系統(tǒng)中的表達(dá)水平。使用  pUC19質(zhì)粒檢測,，轉(zhuǎn)化效率可

達(dá)10 7

本產(chǎn)品僅供科研使用,，請勿用于臨床診斷及其他用途

    注意事項(xiàng)

    1．感受態(tài)細(xì)胞一定要用干冰運(yùn)輸。感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)在  -80℃下保存,，不可多次凍融和放

       置時(shí)間過長,，以免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。

    2．轉(zhuǎn)化所有步驟均在無菌條件下操作,。

    3．包裝中有0.1 ng/μl的pUC19DNA,，供對照試驗(yàn)使用。

    操作步驟

    1．取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中,。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100 μl,，可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。

       以下實(shí)驗(yàn)以50 μl感受態(tài)細(xì)胞為例,。

    2．待感受態(tài)細(xì)胞融化后,，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實(shí)際情況加入適量

       的DNA,，通常100 μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻,，冰浴30分鐘,。

    3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中,，冰上靜置2-3分鐘,。

    4．每個(gè)離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床,，150 rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇,。

    5．根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞,，加到含相應(yīng)抗生素的   SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上,，用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收,，

       倒置培養(yǎng),，37℃培養(yǎng)12-16小時(shí)。

注意：1）涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)調(diào)整,。若轉(zhuǎn)化的DNA總量較多,，可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；若轉(zhuǎn)化的DNA總量較少,，可取200-300 μl轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板,。若預(yù)計(jì)的克隆數(shù)較少，可通過離心（4,000 rpm,，2分鐘）后吸除部分培養(yǎng)液,，懸浮菌體后將其涂布于平板中。

       2）新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干,，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng),。

       3）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少,，可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng),。