人胎盤(pán)cDNA說(shuō)明書(shū)

Human Placenta cDNA

人胎盤(pán)  cDNA

Cat. No.   YJ0568

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組分說(shuō)明

                Cat. No.                 YJ0568

                Volume             100  μl (20 reaction)

  產(chǎn)品簡(jiǎn)介

       本產(chǎn)品是以人胎盤(pán)組織 RNA 為模板,，oligodt 以及 Random 為引物,  用上海研謹(jǐn)生物的高靈敏度的逆轉(zhuǎn)錄酶(YJ0740)

   反轉(zhuǎn)錄得到的 PCR 即用型 cDNA,，可用于 PCR  實(shí)驗(yàn)的陽(yáng)性對(duì)照。

  純度

      OD260/280≈1.8

  操作步驟

       以下舉例為常規(guī) PCR  反應(yīng)體系和反應(yīng)條件,，實(shí)際操作中應(yīng)根據(jù)模板,、引物結(jié)構(gòu)和目的片段大小丌同進(jìn)行相應(yīng)的改進(jìn)

  和優(yōu)化。

  1.  PCR反應(yīng)體系：

   試劑                     50  μl體系                             終濃度

10×Taq PCR Buffer with Mg 2+      5  μl                              1×

dNTP Mix,，2.5 mM each             4  μl                    200  μM each

  Forward Primer,，10  μM           2μl                     0.4  μM

  Reverse Primer，10  μM             2  μl                  0.4  μM

  Human Placenta cDNA                 5  μl

  Taq DNA Polymerase,，2.5 U/μl           0.5  μl

   RNase-Free Water                     up to 50  μl

      注意：1）引物濃度請(qǐng)以終濃度0.1-1.0  μM作為設(shè)定范圍的參考,。擴(kuò)增效率丌高的情況下，可提高引物的濃度,；發(fā)生非特異性反應(yīng)時(shí),，可降 低引物濃度，由此優(yōu)化反應(yīng)體系,。

           2）鎂離子濃度請(qǐng)以終濃度1.5-3 mM作為設(shè)定范圍的參考,。本產(chǎn)品的10×PCR Buffer中已經(jīng)含有15 mM鎂離子，可根據(jù)丌同的引物對(duì)和模板來(lái)調(diào)節(jié)鎂離子濃度,，由此優(yōu)化反應(yīng)體系,。

  2.  將混合好的液體進(jìn)行PCR反應(yīng)。

  3.  結(jié)果檢測(cè)：反應(yīng)結(jié)束后取5 μl反應(yīng)產(chǎn)物,，加入適量上樣緩沖液后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè),。