大量瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒說明書

MaxiGel Extraction Kit

貨號：  YJ0518

保   存：  室溫

組分說明

Cat.No.

YJ0518

50

KitSize

BufferPG

100ml

15ml

10ml

10ml

50

BufferPS

BufferPW（concentrate）

BufferEB

SpinColumnDL 

CollectionTube（2ml）

50

產(chǎn)品簡介

     本試劑盒采用新型硅基質(zhì)膜技術(shù)，通過快速,，簡單的結(jié)合-洗滌-洗脫步驟可從大量普通或低熔點瓊脂糖凝膠中回收純

化 50bp-50kb 的 DNA 片段,，溶膠速度快,，每個吸附柱zui高可吸附 30 μg 的 DNA，純化過程中有效去除引物,、核苷酸,、

酶、礦物油,、瓊脂糖等雜質(zhì),，獲得高純度，完整性好的 DNA 片段,，回收率高達 90%,。本試劑盒回收純化的 DNA 可直接用

于測序、連接和轉(zhuǎn)化,、酶切,、標記、體外轉(zhuǎn)錄等分子生物學(xué)實驗,。

注意事項

1..*次使用前應(yīng)按照試劑瓶標簽的說明在BufferPW中加入無水乙醇,。

2.使用前請檢查BufferPG是否出現(xiàn)結(jié)晶或者沉淀,，如有結(jié)晶或者沉淀現(xiàn)象，可在37℃水浴幾分鐘,，即可恢復(fù)澄清,。

3.電泳時使用新的電泳緩沖液，以免影響電泳和回收效果,。

4.切膠時,，紫外照射時間應(yīng)盡量短，以免對DNA造成損傷,。

5.回收率與初始 DNA 量和洗脫體積有關(guān),。

6.所有離心步驟均為使用常規(guī)臺式離心機室溫下進行離心。

自備：無水乙醇,，離心管

操作步驟

1. 將單一目的DNA條帶從瓊脂糖凝膠中切下（盡量切除多余部分）,，放入干凈的離心管（自備）中，稱取重量,。 

注意：若膠塊的體積過大,，可將膠塊切成碎塊。

2. 向膠塊中加入3倍體積Buffer PG,；當瓊脂糖凝膠濃度>2%時,，建議使用6倍體積BufferPG（如凝膠重為100mg，其體積可視為100μl,，依此類推）,。

3. 50℃孵育10分鐘，其間不斷溫和地上下顛倒離心管,，以確保膠塊充分溶解,。如果還有未溶的膠塊，可再補加一些溶膠液或繼續(xù)放置幾分鐘,，直至膠塊*溶解,。

注意：1）在膠充分溶解后檢測pH值，若pH值大于7.5,，可向含有DNA的膠溶液中加10-30μl 的3M醋酸鈉（pH5.0）將pH值調(diào)到5-7,。

      2）膠塊*溶解后將膠溶液溫度降至室溫再上柱，因為吸附柱在較高溫度時結(jié)合 DNA 的能力較弱,。

4.（可選步驟）當回收片段<500bp或>4kb時,，應(yīng)加入1倍膠體積的異丙醇,，上下顛倒混勻（如凝膠為100mg,，則加入100μl異丙醇）。

注意：當回收片段為500bp-4kb時,，加入異丙醇不會影響回收率,。

5.柱平衡：向已裝入收集管（CollectionTube）中的吸附柱（SpinColumnDL）中加入200  μl Buffer PS,，12,000rpm（~13,400×g）離心2分鐘，倒掉收集管中的廢液,，將吸附柱重新放回收集管中,。

6.將步驟3或者步驟4所得溶液加入到已裝入收集管的吸附柱中，室溫放置2分鐘,，12,000rpm離心1分鐘,，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中,。

注意：吸附柱容積為700μl,，若樣品體積大于700μl 可分批加入。

7.（可選步驟）向吸附柱中加入500μlBufferPG,，12,000rpm離心1分鐘,，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中,。

注意：如果后續(xù)實驗用于直接測序,、體外轉(zhuǎn)錄或顯微注射，推薦用此步驟以除去所有凝膠,。8. 向吸附柱中加入650 μl Buffer PW（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇）,，12,000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液,，將吸附柱放回收集管中,。

9. 注意：如果純化的DNA用于鹽敏感的實驗（例如平末端連接或直接測序），建議加入BufferPW靜置2-5分鐘再離心,。12,000rpm離心2分鐘,，倒掉收集管中的廢液。將吸附柱置于室溫數(shù)分鐘,，以*晾干,。

注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除，乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶促反應(yīng)（酶切,、PCR等）,。為確保下游實驗不受殘留乙醇的影響，建議將吸附柱開蓋,，置于室溫放置數(shù)分鐘,，以*晾干吸附材料中殘余的乙醇。

10.  將吸附柱放到一個新離心管（自備）中,，向吸附膜中間位置懸空滴加100 μl Buffer EB（pH 8.5）,，室溫放置2分鐘。12,000rpm離心2分鐘，收集DNA溶液,。-20℃保存DNA,。注意：1） 洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液,，應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5（可以用NaOH將水的pH值調(diào)到此范圍）,。

2） 為了提高DNA的回收量，可將離心得到的溶液重新滴加到吸附柱中,，重復(fù)步驟10,。

3） 洗脫體積不應(yīng)小于50μl，體積過少會影響回收效率,。

4） 如果使用TE洗脫,，需要考慮其中含有的EDTA是否會影響后續(xù)的酶促反應(yīng)。

5）回收大于10kb的DNA片段時,，BufferEB應(yīng)在50℃水浴中預(yù)熱,，適當延長吸附和洗脫時間，可增加回收效率,。