DH5α感受態(tài)細(xì)胞說明書

   DH5α Competent Cell

   目錄號(hào)：YJ0808

   保存條件：-80℃保存,。

   組分說明

                      Cat. No.                         YJ0808B

                      Size                             10×100  μl

                      DH5α  Competent  Cell            10×100  μl

                      Control DNA pUC19,，0.1    ng/μl      10 μl

   產(chǎn)品簡介

    本產(chǎn)品是采用大腸桿菌DH5α菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞,，可用于DNA

的熱擊轉(zhuǎn)化,。DH5α是一種常用于質(zhì)?？寺〉木辏洇?0lacZΔM15基因產(chǎn)物可與載

體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn)α互補(bǔ),，可用于藍(lán)白斑篩選 recA1和endA1的突變

有利于克隆DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取,。使用pUC19質(zhì)粒檢測，轉(zhuǎn)化效率可

達(dá)108,，適用于的質(zhì)粒DNA克隆并能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定復(fù)制,。

本產(chǎn)品僅供科研使用,，請勿用于臨床診斷及其他用途

注意事項(xiàng)

 1．感受態(tài)細(xì)胞一定要用干冰運(yùn)輸。感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)在 -80℃下保存,，不可反復(fù)凍融和放

    置時(shí)間過長,，以免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。

    2．轉(zhuǎn)化所有步驟均在無菌條件下操作,。

    3．包裝中有0.1ng/μl的pUC19DNA,，供對照試驗(yàn)使用。

    操作步驟

 1．取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中,。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100                                  μl,，可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。

       以下實(shí)驗(yàn)以50μl感受態(tài)細(xì)胞為例,。

 2．待感受態(tài)細(xì)胞融化后,，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實(shí)際情況加入適量

    的DNA，通常100        μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1         ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和）,，用移液器輕輕吹打混勻,，冰浴30分鐘。

 3．42℃熱擊45秒,，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中,，冰上靜置2-3分鐘。

 4．每個(gè)離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素）,，混勻后置于37℃

    搖床,，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇。

 5．根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求,，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞,，加到含相應(yīng)抗生素的                                      SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開,，將平板置于37℃直至液體被吸收,，

    倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時(shí),。

 注意：1）涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)調(diào)整,。若轉(zhuǎn)化的DNA總量較多，可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板,；若轉(zhuǎn)化的DNA總量較少,，可取200-300         μl轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。若預(yù)計(jì)的克隆數(shù)較少,，可通過離心（4,000rpm,，2分鐘）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于平板中,。

   2）新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干,，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng),。

   3）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少,，可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng),。