轉(zhuǎn)基因小鼠模型

轉(zhuǎn)基因和基因敲除技術(shù)是研究基因功能的強大工具。產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因和敲除小鼠的常用方法包括通過囊胚注射或聚集技術(shù)將遺傳修飾的胚胎干細胞引入早期小鼠胚胎,。這些方法會導(dǎo)致產(chǎn)生嵌合體后代,，如果ES細胞可分化成生殖細胞系,，則遺傳修飾可以傳遞給后代,。

我們提供了培養(yǎng)小鼠胚胎干細胞的廣泛工具和技術(shù)，包括金標準的ESGRO/mLif 補充物,，ESGRO*細胞培養(yǎng)基和ESGRO2i無血清/無飼養(yǎng)層細胞培養(yǎng)基,。我們還提供常用的小鼠胚胎培養(yǎng)基以及用于小鼠胚胎的儲存、轉(zhuǎn)移和擴增的EmbryoMAX™ MEF飼養(yǎng)層細胞,。

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加入基因組編輯*研究者團隊

利用胚胎干細胞制備小鼠模型

圖1.  獲得遺傳修飾小鼠的一般步驟,。多能ES細胞可自行購買或從小鼠胚泡分離。ES細胞基因組可通過兩種方式進行修飾：1）在ES細胞中表達外源基因,；2）破壞內(nèi)源基因的表達,。在這兩種情況下，靶向載體含有與靶基因同源的序列,，以及改變靶標和進行陽性/陰性篩選的序列,。將修飾的ES細胞顯微注射到胚泡中。新的CRISPR / Cas9基因組編輯系統(tǒng)提供了直接顯微注射靶標mRNA和Cas9 mRNA至受精卵的選擇,。然后將胚泡注射到小鼠中產(chǎn)生嵌合體小鼠,。這些小鼠與正常小鼠交配以產(chǎn)生具有所需遺傳修飾的小鼠。

 小鼠胚胎干細胞培養(yǎng)

ESGRO^® mLIF添加劑

維持多能性 十多年

十多年來,，干細胞研究人員相信使用ESGRO^®LIF補充物能夠維持其小鼠ES細胞系的多能性狀態(tài),。未分化小鼠ES細胞培養(yǎng)的金標準ESGRO^®mLIF有如下特點：

• *的ES細胞分化抑制，獲得可靠的效果
• 方便的包裝規(guī)格,，以活性單位/毫升形式提供
• 無批間差異,，獲得更佳的重復(fù)性
• 靈活; 支持無飼養(yǎng)層和基于飼養(yǎng)層的細胞培養(yǎng)

堿性磷酸酶染色表明，ESGRO®補充物可抑制mES細胞分化,。

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無血清和無飼養(yǎng)層培養(yǎng)基

ESGRO Complete™ PLUS培養(yǎng)基

ESGRO Complete™系統(tǒng)是*個能夠無血清,、無飼養(yǎng)層培養(yǎng)小鼠ES細胞的系統(tǒng)。該系統(tǒng)的基礎(chǔ)是ESGRO Complete™克隆級培養(yǎng)基,，通過提供基本營養(yǎng)成分（在傳統(tǒng)培養(yǎng)方法中,，通常由血清和飼養(yǎng)層細胞提供）支持小鼠ES細胞的自我更新。這些營養(yǎng)成分包括激素,、維生素,、生長因子mLIF和BMP4，以及選擇性GSK3β抑制劑,，以在無血清條件下提高小鼠ES細胞生長和活力,。

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ESGRO^®-2i 培養(yǎng)基

基于使用LIF與GSK3β和Mek 1/2小分子抑制劑建立和維持ES細胞 “多能性基態(tài)1-3”狀態(tài)的原理,，ESGRO-2i培養(yǎng)基或補充物于維持“初始狀態(tài)” 或“基態(tài)”培養(yǎng)條件，增強ES細胞的活力和易培養(yǎng)性,，并可在沒有血清和飼養(yǎng)層細胞的情況下增強維持多能性,。

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在ESGRO®-2i培養(yǎng)基中生長的小鼠ES細胞，表達多能性標記物Oct-4,，Sox-2和SSEA1（從左至右）,。

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 MEF飼養(yǎng)層細胞

PMEF細胞的EmbryoMax系列為研究人員提供了一種方便的ES細胞培養(yǎng)解決方案，無需進行耗時的MEF飼養(yǎng)層細胞分離和制備,。這些細胞來源于第13天的胚胎,，經(jīng)過3次傳代（每次傳代有2次群體倍增）后冷凍于小瓶中。5瓶裝供應(yīng),，每個小瓶含有約5-6×10⁶個成纖維細胞,。
 

 小鼠胚胎培養(yǎng)基

在胚胎收集、操作和轉(zhuǎn)移應(yīng)用中,，我們可提供多種小鼠胚胎培養(yǎng)基和試劑,，包括M2、改良的M16,、FHM和專有的KSOM培養(yǎng)基配方,。我們的培養(yǎng)基在小鼠胚胎上進行過測試，并使用高質(zhì)量的原料制造,。許多經(jīng)典配方都包含有液體和粉末形式的EmbryoMax培養(yǎng)基。

胚胎發(fā)育階段

熱門胚胎培養(yǎng)基

M2  |  M16  |  FHM  |  KSOM  |  HTF  |  Mineral Oil  |  BSA  |  透明質(zhì)酸酶

新產(chǎn)品聚焦

EmbryoMax® KSOM胚胎培養(yǎng)基           KSOM胚胎培養(yǎng)基是原始KSOM配方的新型*的緩沖液改良版： 一種既可在大氣條件下處理胚胎,，又可在CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)胚胎的培養(yǎng)基,。 在多個小鼠品系中具有較高的胚泡形成頻率 無需進行培養(yǎng)基預(yù)平衡步驟 立即訂購

 小鼠基因分型

KOD Xtreme™ 熱啟動DNA聚合酶

用少的步驟從困難的粗提樣品進行DNA擴增

KOD Xtreme™熱啟動DNA聚合酶是您應(yīng)對困難PCR情況，適用于：對來自粗提樣品（如小鼠尾尖裂解物）的DNA進行擴增,，對可抑制或造成PCR擴增數(shù)據(jù)偏倚的高GC含量或重復(fù)序列（T / A）進行擴增,。

特性和優(yōu)點：

• 經(jīng)過優(yōu)化，可用少的步驟對復(fù)雜的粗提樣品成功進行PCR
• 可高效擴增高達90%GC含量的模板
• 具有高于Taq混合物十倍的保真度
• 可擴增長達24kb的基因組靶標
• 可擴增長達40kb的質(zhì)粒/噬菌體靶標
• 可避免引物錯配或形成引物二聚體
• 兼容自動化工作流程的方便的環(huán)境溫度設(shè)置

用少的步驟擴增來自粗提組織裂解物的DNA,，從而節(jié)省時間并在保持高質(zhì)量數(shù)據(jù)的同時大限度降低成本,。
 

用多種PCR酶從經(jīng)堿裂解制備的小鼠尾裂解物中擴增靶基因。KOD Xtreme™熱啟動DNA聚合酶成功擴增了兩個靶基因（Tg和WT）,。

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