蛋白酶k是一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶,，用于生物樣品中蛋白質(zhì)的一般降解,。從林伯氏白色念球菌（tritirachium album limber）中純化得到,。據(jù)資料顯示：該酶有兩個ca2+結(jié)合位點,，它們離酶的活性中心有一定距離,，與催化機理并無直接關系。然而,，如果從該酶中除去ca2+,，由于出現(xiàn)遠程的結(jié)構(gòu)變化，催化活性將喪失80%左右,，但其剩余活性通常已足以降解在一般情況下污染酸制品的蛋白質(zhì),。所以，蛋白酶k消化過程中通常加入edta（以抑制依賴于mg2+的核酸酶的作用）,。但是,，如果要消化對蛋白酶k具有較強耐性的蛋白，如角蛋白一類,，則可能需要使用含有1mmol/l ca2+而不含edta的緩沖液,。在消化完畢后、純化核酸前要加入EGTA（ph8.0）至終濃度為2mmol/l,以鰲合ca2+,。

　　蛋白酶K,，是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵,。此酶經(jīng)純化去除了RNA酶和DNA酶活性,。由于蛋白酶K在尿素和SDS中穩(wěn)定，還具有降解天然蛋白質(zhì)的能力,，因而它應用很廣泛,，包括制備脈沖電泳的染色體DNA，蛋白質(zhì)印跡以及去除DNA和RNA制備中的核酸酶,。蛋白酶K的一般工作濃度是50—100μg/ml,。在較廣的pH范圍內(nèi)（pH 4-12.5）均有活性。

　　推薦反應緩沖液：50mM Tris-HCl （pH7.5）,10mM CaCl2 ,。

　　蛋白酶K配制標準：20mg/ml蛋白酶K配制標準（proteinase K）：將200mg的蛋白酶K加入到9.5ml水中,，輕輕搖動,，直至蛋白酶K*溶解。不要渦旋混合,。加水定容到10ml,，然后分裝成小份貯存于-20℃。

蛋白酶k的作用

　　值得注意的是,，蛋白酶K在原位雜交技術(shù)中通常用于雜交前的處理,它具有消化包圍靶DNA蛋白質(zhì)的作用,以增加探針與靶核酸結(jié)合的機會,提高雜交信號.但蛋白酶K的濃度過高,、消化時間過長或孵育溫度過高時,都會對細胞的結(jié)構(gòu)有一定的破壞,導致組織切片的脫落,細胞核的消失,從而影響雜交結(jié)果.EDTA緩沖液可以替代蛋白酶K的作用,解決上述出現(xiàn)的問題,并能達到理想的染色效果.

蛋白酶k的保存

　　保存：保存在－20℃冰箱里，避免反復凍融,，有效保證12月,。

　　孵育溫度為55至65℃，理想孵育溫度為58℃,，孵育時間為15分鐘至48小時,；理想孵育時間為2小時。

編輯本段廣泛應用

　　蛋白酶K已廣泛應用在皮革,、毛皮,、絲綢、醫(yī)藥,、食品,、釀造等方面。皮革工業(yè)的脫毛和軟化已大量利用蛋白酶,，既節(jié)省時間,，又改善勞動衛(wèi)生條件。蛋白酶還可用于蠶絲脫膠,、肉類嫩化,、酒類澄清。臨床上可作藥用,，如用胃蛋白酶治療消化不良,，用酸性蛋白酶治療支氣管炎，用彈性蛋白酶治療脈管炎以及用胰蛋白酶,、胰凝乳蛋白酶對外科化膿性創(chuàng)口的凈化及胸腔間漿膜粘連的治療,。加酶洗衣粉是洗滌劑中的新產(chǎn)品，含堿性蛋白酶,，能去除衣物上的血漬和蛋白污物,，但使用時注意不要接觸皮膚，以免損傷皮膚表面的蛋白質(zhì),，引起皮疹,、濕疹等過敏現(xiàn)象。

產(chǎn)品簡介：
貨號： GPE-2009001
批號： 201003008
規(guī)格： 每個獨立包裝中含有100毫克的蛋白酶K凍干粉
比活性值： 40 U/mg蛋白，17.5 U/mg干粉
來源種屬： 林伯氏白色念球菌（Tritirachium album limber）
相對分子質(zhì)量：29,730
貯存條件：
干粉狀態(tài)可在2~4oC條件下低溫保藏,。使用時,，建議將每個獨立包裝的干粉全部溶解，分裝為適當體積后,，-20oC貯存,。
正確的貯存條件下，干粉狀態(tài)的有效期可達一年,。液體狀態(tài)的有效期為半年,。打開包裝使用后，如果在2~8oC環(huán)境下放置超過一周時間,，建議過濾除菌后再用于實驗,。
貯存緩沖液：20 mM Tris-HCl （pH 7.4），1 mM氯化鈣,，50%甘油（稀釋用緩沖液不含甘油）。
質(zhì)量控制：
活性單位定義
37oC,、pH 7.5條件下,，每分鐘可水解底物酪蛋白生成1 μmol酪氨酸的蛋白酶K 的量，定義為一個單位（U）,。
脫氧核糖核酸酶殘留
以λ DNA為底物,，37oC消化6小時以上，未檢測到脫氧核糖核酸酶活性,。
核糖核酸酶殘留
25oC消化16小時以上,，未檢測到核糖核酸酶活性。
產(chǎn)品用途：
蛋白酶K是一種用途廣泛的非特異性的絲氨酸蛋白酶,。在pH 4到pH 12的條件下均有活性,，在SDS、尿素或EDTA存在時亦很穩(wěn)定,。常用于提取mRNA,、基因組DNA，或用于從各種細胞中提純DNA和RNA時消化雜蛋白,。還可用于糖蛋白的修飾,，以及蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)研究等方面。

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