?遍在蛋白(Ubquitin)(Ub)是在整個真核細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的高度保守的76個氨基酸蛋白。Ub介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)調(diào)節(jié)著大量的細(xì)胞過程,,包括靶向的蛋白質(zhì)降解,,細(xì)胞周期進(jìn)程,DNA修復(fù),,蛋白質(zhì)運(yùn)輸,,炎癥反應(yīng),病毒出芽和受體內(nèi)吞作用,。其中目標(biāo)蛋白用單個或多個單體的Ub(附著在底物上多個位點(diǎn)的單體Ub)或聚合物的Ub鏈標(biāo)記(Fushman and Walker,,2010)。近的論證表明,,泛素本身可以通過PTEN激酶誘導(dǎo)的假定激酶1(PINK1)的磷酸化作用進(jìn)行修飾,,這為連接細(xì)胞中兩個重要的信號通路提供了重大突破。磷酸化和泛素化(Kane等人,,2014,; Kazlauskaite等人,2014,; Koyano等人,,2014)。幾項研究表明,PINK1將Ser65上的泛素直接磷酸化,,該殘基也是Parkin Ubl域共有的殘基(Kane等,,2014; Kazlauskaite等,,2014,; Koyano等,2014),。Parkin被Ser65磷酸化的泛素激活,,其方式與泛素與靶蛋白上賴氨酸殘基結(jié)合的能力無關(guān)。人們認(rèn)為,,Parkin引發(fā)和激活的機(jī)制是通過在Ser65上PINK1磷酸化誘導(dǎo)的構(gòu)象變化,,然后在RING1域上結(jié)合PINK1 Ser65磷酸化的泛素而發(fā)生的,從而優(yōu)化了Parkin的泛素化活性(Kazlauskaite等人,,2014年,; Koyano et al。,,2014),。
磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了幾種磷酸化肽,它們與泛素蛋白酶體途徑(UPP)的蛋白質(zhì)具有同源性,,包括泛素(已鑒定出pThr7),,泛素類似物修飾劑和含有泛素結(jié)合結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)(Bian等,2014; Bennetzen等,,2010,; Kettenbach等,2011,; Sharma等,,2014)。
因此,,在這種磷酸蛋白質(zhì)組學(xué)研究中已經(jīng)確定的磷酸化泛素的生物素化形式提供了探測這些物種在信號傳導(dǎo)途徑中可能作用和功能的工具(例如在下拉/捕獲分析中),。
生物素-Ahx-泛素(pThr7)(Cat#60-0203-050)是一種磷酸化的泛素,可與非磷酸化的對照生物素-Ahx-泛素(合成)(Cat#60-0201-050)一起用于實(shí)驗(yàn)中,。
參考:
Bennetzen MV,,Larsen DH,Bunkenborg J,,Bartek J,,Lukas J和Andersen JS(2010)在DNA損傷反應(yīng)過程中,核蛋白質(zhì)組的位點(diǎn)特異性磷酸化動力學(xué),。分子細(xì)胞蛋白質(zhì)組學(xué),9,1314-1323,。
邊燕,,宋C,程K,,董敏,,王芳,黃潔等,。(2014)一種酶輔助的RP-RPLC方法,,用于深入分析人肝磷酸化蛋白質(zhì)組。蛋白質(zhì)組學(xué)雜志,,96,,253-262。
Fushman D和Walker O(2010)使用分子模型探索了聚泛素構(gòu)象的連鎖依賴性,。Journal of Molecular Biology,,395,803-814,。
Kane LA,,Lazarou M,F(xiàn)ogel AI,,Li Y,,Yamano K,Sarraf SA等人(2014)PINK1磷酸化泛素以激活Parkin E3泛素連接酶活性,。J Cell Biol,,205,143-153,。
Kazlauskaite A,,Kondapalli C,Gourlay R,,Campbell DG,,Ritorto MS,Hofmann K等,。(2014)Parkin被Ser65處泛素的PINK1依賴性磷酸化激活,。生物化學(xué)雜志,460,,127-139,。
Koyano F,Okatsu K,,Kosako H,,Tamura Y,Go E,Kimura M等人(2014)泛素被PINK1磷酸化以激活Parkin,。自然,,510,162-166,。
Sauve V和Gehring K(2014)磷酸化的泛素:Parkin激活中PINK1的新陰影,。細(xì)胞研究,24,,1025-6,。
Sharma K,D'Souza RC,,Tyanova S,,Schaab C,Wisniewski JR,,Cox J等人(2014)超深層人類磷酸化蛋白質(zhì)組揭示了基于Tyr和基于Ser / Thr的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的*調(diào)節(jié)性質(zhì),。Cell Rep,8,,1583-1594,。
Shiromizu T,Adachi J,,Watanabe S,,Murakami T,Kuga T,,Muraoka S等人(2013)鑒定neXtProt數(shù)據(jù)庫中的缺失蛋白和PhosphoSitePlus數(shù)據(jù)庫中未注冊的磷酸肽,,這是以染色體為中心的人類蛋白質(zhì)組計劃的一部分。J蛋白質(zhì)組研究,,12,,2414-2421。