PolyPlus-transfection（PT）是一家位于法國的生物技術(shù)公司，目前已經(jīng)通過了ISO9001:2000質(zhì)量體系認(rèn)證。該公司擁有十幾年的的轉(zhuǎn)染試劑研發(fā)經(jīng)驗,，已經(jīng)開發(fā)了一系列的轉(zhuǎn)染試劑,，如：基因的體內(nèi)和體外轉(zhuǎn)染試劑,、寡核苷酸轉(zhuǎn)染試劑和siRNA轉(zhuǎn)染試劑等,，可以根據(jù)不同的需要獲得穩(wěn)定或瞬時的轉(zhuǎn)染效果

PolyPlus jetCRISPR產(chǎn)品

jetCRISPR™

用于基因組編輯的RNP轉(zhuǎn)染試劑

• 專為Cas蛋白（Cas9,，Cpf1）設(shè)計并指導(dǎo)RNA遞送
• 基因組編輯效率高
• 出色的細(xì)胞活力和形態(tài)
• 快速可靠的基因編輯
• 易于使用：反向和正向協(xié)議

技術(shù)指標(biāo)

摘要

CRISPR / Cas工程核酸酶系統(tǒng)是功能強(qiáng)大且高度特異性的基因組編輯工具,。CRISPR / Cas是具有指導(dǎo)RNA（gRNA）分子的兩組分系統(tǒng),，該分子驅(qū)動Cas核酸酶（Cas9,，Cpf1）到基因組內(nèi)的特定目標(biāo)序列，以引入遺傳修飾（突變,，插入或缺失）,。

jetCRISPR™是一種創(chuàng)新試劑，專門設(shè)計用于在CRISPR / Cas9和CRISPR / Cpf1實驗中提供RNP,。jetCRISPR™帶來了很高的CRISPR基因組編輯效率,，同時保持了出色的細(xì)胞活力和轉(zhuǎn)染后的形態(tài)。使用先進(jìn)的技術(shù)進(jìn)行CRISPR / Cas9和CRISPR / Cpf1 RNP遞送,！

訂購信息

1.5 ml jetCRISPR™轉(zhuǎn)染試劑足以執(zhí)行約 在6孔板中進(jìn)行300次轉(zhuǎn)染,。

高基因組編輯效率

jetCRISPR™是專為RNP（指導(dǎo)RNA和Cas9蛋白復(fù)合物）的高轉(zhuǎn)染效率而設(shè)計的，因此可在不同細(xì)胞類型中的多種靶標(biāo)上實現(xiàn)cas9介導(dǎo)的高基因組編輯效率（圖1和2）,。

圖1：在HeLa細(xì)胞中使用jetCRISPR™實現(xiàn)高基因組編輯效率,。在96孔板的每孔中，使用幾種RNP濃度的SpCas9核酸酶和HPRT1 sgRNA或陰性對照與0.3 µl jetCRISPR™試劑結(jié)合在HeLa細(xì)胞中進(jìn)行RNP轉(zhuǎn)染,。在48小時后轉(zhuǎn)染,，T7消化產(chǎn)物在2％瓊脂糖凝膠上運(yùn)行，并與由G顯示BET染色：箱透（Syngene公司^®）,。收購均與Genesnap軟件進(jìn)行（Syngene公司^®）和INDEL的量化用的Genetools軟件（Syngene公司執(zhí)行^®）,。1：1083 bp的未切割片段； 2：827 bp的長切割片段,； 3：256 bp的短切割片段,。

jetCRISPR™轉(zhuǎn)染試劑的基因編輯效率比其他競爭對手更高，這使其成為CRISPR應(yīng)用的優(yōu)選產(chǎn)品,。

圖2：在用陽離子脂質(zhì)體比較jetCRISPR™獲得了優(yōu)異的基因組編輯效率^® CRISPRMAX™,。RNP轉(zhuǎn)染的A549和用30nM的RNP（SpCas9核酸酶和HPRT1因組）與jetCRISPR™試劑的0.3微升或0.3微升的Lipofectamine HEK-293細(xì)胞中進(jìn)行^® CRISPRMAX™，每一個96孔板的孔,。轉(zhuǎn)染后48小時,，通過使用T7核酸內(nèi)切酶方法計算INDEL的百分比（％）來評估基因組編輯。該INDEL％是通過使用Genetools軟件（Syngene公司確定^®）,。

出色的細(xì)胞活力

在Polyplus-transfection中,，我們很自豪能使用對細(xì)胞極為溫和的試劑，在整個實驗過程中保持出色的細(xì)胞活力和形態(tài),。jetCRISPR™與血清和抗生素均兼容,，因此可以在健康細(xì)胞的宜條件下進(jìn)行RNP轉(zhuǎn)染（圖3）,。

圖3：jetCRISPR™轉(zhuǎn)染后48小時的細(xì)胞活力和形態(tài)極棒。使用30 nM RNP（SpCas9核酸酶和HPRT1 sgRNA）在96孔板的每孔中用0.3 µl jetCRISPR™試劑對HEK-293和A549細(xì)胞進(jìn)行RNP轉(zhuǎn)染,。在48小時后轉(zhuǎn)染,，細(xì)胞形態(tài)由相襯ZOE熒光細(xì)胞成像可視化（BIORAD ^®）。

快速可靠的基因編輯

直接將Cas9作為蛋白質(zhì)而不是質(zhì)粒進(jìn)行傳遞,，可以輕松進(jìn)行基因組編輯,，因為該蛋白質(zhì)易于使用。使用jetCRISPR™傳遞Cas9蛋白和gRNA可以實現(xiàn)快速可靠的基因編輯（圖4）,。此外,，Cas9蛋白從細(xì)胞中清除的速度將比質(zhì)粒更快，因此可將脫靶效應(yīng)降至低,，并實現(xiàn)更具體的基因組編輯（Kim S等人,；Genome Research 2014； 24：1012-1019）,。

圖4：用jetCRISPR™獲得的HEK-293細(xì)胞快速,，可靠的基因編輯效率。使用30 nM RNP（Cas9蛋白和HPRT1 sgRNA）在96孔板中每孔加0.3μljetCRISPR™試劑在HEK-293細(xì)胞中進(jìn)行RNP轉(zhuǎn)染,。通過使用T7核酸內(nèi)切酶方法計算INDEL的百分比（％）,，可以在不同時間點(diǎn)評估基因組編輯。該INDEL％是通過使用Genetools軟件（Syngene公司確定^®）,。

易于使用

jetCRISPR™是作為即用型解決方案提供的?，F(xiàn)在，轉(zhuǎn)染RNP是一個非常簡單的過程,，只需幾個步驟：形成RNP復(fù)合物,，添加轉(zhuǎn)染試劑并添加到孔中！

反向轉(zhuǎn)染和正向轉(zhuǎn)染都非常適合與jetCRISPR™一起使用,，因此使您可以調(diào)整方案以適合您正在處理的細(xì)胞,，板的形式以及分析時間。通過使用反向協(xié)議（圖5）,，數(shù)據(jù)將比使用正向協(xié)議的日期早一天,。

圖5：jetCRISPR™反向方案

影片

技術(shù)支持專家Alengo Nyamay'antu（PhD）介紹了基因組編輯中的轉(zhuǎn)染趨勢。她概述了將引導(dǎo)RNA和Cas9核酸酶同時傳遞到細(xì)胞中的解決方案,。