intronbio 25021說(shuō)明書

i-Taq™ DNA Polymerase

i-Taq™DNA聚合酶

產(chǎn)品信息

描述

高純度i-Taq™PCR核心試劑盒,，無(wú)論模板類型和反應(yīng)條件如何,，均可顯示穩(wěn)定,，的DNA擴(kuò)增

• •94 KDa熱穩(wěn)定DNA聚合酶
• •高純度Taq DNA聚合酶
     - 去除大腸桿菌衍生的蛋白質(zhì)和DNA,，可作為PCR來(lái)源
• •適用于從克隆DNA到人類基因組DNA的DNA
• •緩沖液優(yōu)化,，以顯示良聚合酶活性,，無(wú)論模板類型或反應(yīng)條件如何

i-Taq™DNA聚合酶是一種94kDa的熱穩(wěn)定DNA聚合酶,，通過(guò)克隆Thermus aquaticus（菌株YT1）的聚合酶基因在大腸桿菌中表達(dá),。它去除了大腸桿菌來(lái)源的蛋白質(zhì)和DNA，它可以作為PCR中的污染物,，是穩(wěn)定有效的DNA擴(kuò)增產(chǎn)物,。基因組DNA,，cDNA等可以擴(kuò)增至5Kb,。PCR（聚合酶鏈反應(yīng)）是通過(guò)特異性重復(fù)特定DNA位點(diǎn)的合成來(lái)擴(kuò)增試管中所需DNA分子的方法。結(jié)果,，可以使用非常少量的DNA合成大量的DNA,。當(dāng)然，它廣泛用于基礎(chǔ)生物學(xué),，醫(yī)學(xué)和生物學(xué)領(lǐng)域,。我們現(xiàn)在正在簡(jiǎn)單快捷地?cái)U(kuò)大其在法醫(yī)，食品,，環(huán)境衛(wèi)生和動(dòng)植物檢驗(yàn)領(lǐng)域的使用范圍,。⁵⁸體外-10 倍,。擴(kuò)增的DNA可用于如下的各種實(shí)驗(yàn)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,，可以應(yīng)用各種醫(yī)學(xué)研究,。在開(kāi)發(fā)該方法的早期，使用大腸桿菌DNA聚合物進(jìn)行PCR,，因此必須在每次變性時(shí)補(bǔ)充變性大腸桿菌的DNA聚合酶,。然而，通過(guò)在PCR中使用從Thermus aquaticus分離的熱穩(wěn)定DNA聚合酶,，我們不必每一步都做補(bǔ)充酶的麻煩任務(wù),。結(jié)果，PCR成為分子生物學(xué)*的方法,。PCR具有一系列三個(gè)步驟并重復(fù)30至40次,。

PCR的步是DNA的變性，通過(guò)加熱分離兩條DNA鏈,。每個(gè)分離的DNA用作模板,，變性溫度取決于DNA中G + C的量和長(zhǎng)度。PCR的第二步是退火,。在此階段,，引物與模板DNA結(jié)合，退火溫度是決定反應(yīng)準(zhǔn)確性的重要因素,。如果溫度太高,，引物將與模板DNA結(jié)合得太弱。如果溫度太低,，可以擴(kuò)增不需要的DNA,，因?yàn)橐锓翘禺愋越Y(jié)合。PCR的第三步是延伸步驟,。在這個(gè)階段,，耐熱DNA聚合酶將從模板DNA產(chǎn)生新的DNA。i-Taq™DNA聚合酶除高純度酶外,，通過(guò)優(yōu)化緩沖液組合物以顯示良聚合酶活性,，無(wú)論模板類型或模板的一半，都可以獲得高度可重復(fù)的結(jié)果,。由于用該酶擴(kuò)增的大多數(shù)產(chǎn)物在3端具有堿基A,，因此可以將PCR產(chǎn)物原樣克隆到T載體中。它也可以通過(guò)用DNA聚合酶如Klenow DNA聚合酶或T4 DNA聚合酶填充它而將其磷酸化成平末端而克隆到平端載體中,。

應(yīng)用

• 01基因組DNA,，cDNA擴(kuò)增至5kb
• 02T / A克隆或平端克隆

套件內(nèi)容

技術(shù)數(shù)據(jù)

靈敏度比較數(shù)據(jù)（與其他公司比較）

i-Taq TM DNA聚合酶與公司A，B相同功能的DNA聚合酶的靈敏度比較。在該實(shí)驗(yàn)中,，通過(guò)濃縮稀釋牛gDNA并用CSF引物擴(kuò)增,。

泳道M，100bp DNA標(biāo)記; 泳道1,1ng gDNA; 泳道2,100pg gDNA; 泳道3,10pg gDNA; 泳道4,1 gg gDNA; 泳道5,100fg gDNA; 泳道N,，陰性對(duì)照

批次穩(wěn)定性數(shù)據(jù)

確認(rèn)了每批i-Taq TM DNA聚合酶的靈敏度活性,。從連續(xù)稀釋的SNU-1 cDNA和λDNA中擴(kuò)增GAPDH（575bp）和1Kb片段以確認(rèn)靈敏度。使用1單位的i-Taq TM DNA聚合酶擴(kuò)增總共20ml反應(yīng)混合物,，并通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳分析5ml。

泳道M,，100bp DNA標(biāo)記; 1 Kb DNA標(biāo)記; 泳道N,，陰性對(duì)照