bio-helix NA015-0100使用方法

PureDireX - PDC02-0100 / NA015-0100

基因組DNA分離雙試劑盒（基于柱）

尺寸：100 rxns

注意：PureDireX /純化試劑盒/提取試劑盒/ NA015-0100 /基因組DNA 

PureDireX基因組DNA分離雙試劑盒（基于柱）

DUAL基因組DNA分離試劑盒（血液/培養(yǎng)細胞/真菌）結合了試劑系統(tǒng)和離心柱系統(tǒng),。該試劑盒專門用于從全血，冷凍血液,，血沉棕黃層,，培養(yǎng)的動物/細菌細胞和真菌中分離基因組DNA。這種*的試劑系統(tǒng)可確保樣品中的總DNA具有高產(chǎn)量和高質量,。旋轉柱系統(tǒng)設計用于純化或濃縮先前已用試劑分離的DNA產(chǎn)物,。整個過程可在1小時內完成，無需苯酚/氯方萃取,。純化的DNA適用于PCR或其他酶促反應。
 

樣品

高達300μl的全血
高達200μl的冷凍血液
高達200μl的血沉棕黃層
培養(yǎng)的動物細胞（多1 x10 ^ 7）
培養(yǎng)的細菌細胞（多1 x10 ^ 9）
真菌細胞（向上）到5 x 10 ^ 7）

格式化
試劑和旋轉列

產(chǎn)量
高達50微克

操作時間
60分鐘內

洗脫體積為
50?200μl

[PureDireX / PDC02-0100 / Bio-Helix]

• 協(xié)議

▍新鮮全血或淡黃色外套

試劑系統(tǒng)協(xié)議

步驟1 - 樣品細胞收獲
1.在EDTA-Na2處理的收集管（或其他抗凝血劑混合物）中收集血液。
2.將多300μl血液或200μl血沉棕黃層轉移至無菌1.5 ml微量離心管中,。
3,。加入900μlBufferRL并通過倒置混合,。
4.將試管在室溫下孵育10分鐘（在孵育期間倒置兩次）。
5.以4,000 xg離心5分鐘,。
6.*除去上清液,，通過移液沉淀將細胞重懸于50μlBufferRL中。

第2步 - 裂解
1,。將300μl緩沖液CL加入來自步驟1的重懸浮細胞中并通過渦旋混合,。
2.在60°C孵育10分鐘或直至樣品裂解液澄清。在孵育期間,，每3分鐘倒置一次管,。
可選步驟：RNA降解（如果需要無RNA基因組DNA，請執(zhí)行此可選步驟,。）
3,。向樣品裂解物中加入5μlRNaseA（10mg / ml）并通過渦旋混合。在室溫下孵育5分鐘,。

步驟3 - 去除蛋白質
1.將100μl緩沖液PO加入樣品裂解液中并立即渦旋10秒,。
2.在冰上孵育5分鐘。
3.以14-16,000xg離心3分鐘,。
4.將上清液轉移到干凈的1.5ml微量離心管中,。
切換步驟
◆如果需要更純的DNA，請切換到柱系統(tǒng)（DNA Pure）協(xié)議,。

步驟4 - DNA沉淀
1.將300μl異丙醇加入到步驟3的樣品中,，并通過反轉20次充分混合。
2.以14-16,000xg離心5分鐘,。
3.棄去上清液,，加入300μl70％乙醇洗滌沉淀。
4.以14-16,000xg離心3分鐘,。
5.棄去上清液并將顆粒風干10分鐘,。

步驟5 DNA補液
1。加入50-100μl緩沖液E,，在60℃下孵育5-10分鐘以溶解DNA沉淀,。在孵育期間，輕拍管底部以促進DNA再水合,。

柱系統(tǒng)（DNA Pure）方案
*在初次使用前,，向緩沖液W2中加入60ml無水乙醇。
*使用前將緩沖液E預熱至60°C,。
步驟1 - 樣品制備
1.將400μl緩沖液BD加入步驟3蛋白質去除的樣品中并劇烈搖動 ,。

步驟2 - DNA結合
1.將DG柱置于2 ml收集管中。
2.將樣品混合物從上一步驟轉移到DG色譜柱,。
3.以14-16,000 xg離心30秒,。
4.丟棄流通液并將DG柱放回同一收集管中,。

步驟3 - 洗滌
1.將400μl緩沖液W1加入DG柱中。
2.以14,000 xg離心30秒,。
3.丟棄流通液并將DG柱放回同一收集管中,。
4.將600μl緩沖液W2（添加乙醇）加入DG柱中。
5.以14,000 xg離心30秒,。
6.丟棄流通液并將DG柱放回同一收集管中,。
7.再次以14,000xg離心2分鐘以除去殘留的緩沖液W2。

步驟4 - DNA洗脫
1.將干燥的DG柱置于干凈的1.5 ml微量離心管中,。
2.將50-200μl預熱緩沖液E或TE（未提供）加入柱基質的中心,。
3.將其在60℃下靜置5分鐘。
4.以14-16,000xg離心2分鐘以洗脫純化的DNA,。

▍培養(yǎng)的哺乳動物細胞

試劑系統(tǒng)協(xié)議

步驟1 - 樣品細胞收獲
1.將培養(yǎng)的哺乳動物細胞（多10 ^ 7）轉移到無菌的1.5ml微量離心管中,。
2.以6,000 xg離心1分鐘。
3.*除去上清液,，通過移液沉淀將細胞重懸于50μlBufferRL中。

步驟2 - 裂解
1.將300μl緩沖液CL加入來自步驟1的重懸浮細胞中并通過渦旋混合。
2.在60°C孵育10分鐘或直至樣品裂解液澄清,。在孵育期間,，每3分鐘倒置一次管,。
可選步驟：RNA降解（如果需要無RNA基因組DNA,，則執(zhí)行此可選步驟,。）
3。向樣品裂解液中加入5μlRNaseA（10 mg / ml）并通過渦旋混合,。在室溫下孵育5分鐘,。

步驟3 - 去除蛋白質
1.將100μl緩沖液PO加入樣品裂解液中并立即渦旋10秒,。
2.在冰上孵育5分鐘。
3.以14-16,000xg離心3分鐘,。
4.將上清液轉移到干凈的1.5ml微量離心管中,。
切換步驟
◆如果需要更純的DNA，請切換到柱系統(tǒng)（DNA Pure）協(xié)議,。

步驟4 - DNA沉淀
1.將300μl異丙醇加入到步驟3的樣品中，并通過反轉20次充分混合。
2.以14-16,000xg離心5分鐘,。
3.棄去上清液,，加入300μl70％乙醇洗滌沉淀,。
4.以14-16,000xg離心3分鐘,。
5.棄去上清液并將顆粒風干10分鐘,。

步驟5 - DNA再水合
1.加入50-100μl緩沖液E,，在60℃下孵育5-10分鐘以溶解DNA
沉淀。在孵育期間,，輕拍管底部以促進DNA再水合。

柱系統(tǒng)（DNA Pure）方案
*在初次使用前，向緩沖液W2中加入60ml無水乙醇,。
*使用前將緩沖液E預熱至60°C,。

步驟1 - 樣品制備
1.將400μl緩沖液BD加入步驟3蛋白質去除的樣品中并劇烈搖動。

步驟2 - DNA結合
1.將DG柱置于2 ml收集管中,。
2.將樣品混合物從上一步驟轉移到DG色譜柱,。
3.以14-16,000 xg離心30秒。
4.丟棄流通液并將DG柱放回同一收集管中,。

步驟3 - 洗滌
1.將400μl緩沖液W1加入DG柱中,。
2.以14,000 xg離心30秒。
3.丟棄流通液并將DG柱放回同一收集管中,。
4.將600μl緩沖液W2（添加乙醇）加入DG柱中,。
5.以14,000 xg離心30秒。
6.丟棄流通液并將DG柱放回同一收集管中。
7.再次以14,000xg離心2分鐘以除去殘留的緩沖液W2,。

步驟4 - DNA洗脫
1.將干燥的DG柱置于干凈的1.5 ml微量離心管中,。
2.將50-200μl預熱緩沖液E或TE（未提供）加入柱基質的中心。
3.將其在60℃下靜置5分鐘,。
4.以14-16,000xg離心2分鐘以洗脫純化的DNA,。

▍Gram-陰性細菌細胞

試劑系統(tǒng)協(xié)議

步驟1 - 樣品細胞收獲
1.將培養(yǎng)的細菌細胞（多10 ^ 9）轉移到無菌的1.5ml微量離心管中。
2.以12,000 xg離心1分鐘,。
3.*除去上清液,，通過移液沉淀將細胞重懸于50μlBufferRL中。

步驟2 - 裂解
1.將300μl緩沖液CL加入來自步驟1的重懸浮細胞中并通過渦旋混合,。
2.在60°C孵育10分鐘或直至樣品裂解液澄清,。在孵育期間，每3分鐘倒置一次管,。
可選步驟：RNA降解（如果需要無RNA基因組DNA,，則執(zhí)行此可選步驟,。）
3,。向樣品裂解液中加入5μlRNaseA（10 mg / ml）并通過渦旋混合。在室溫下孵育5分鐘。

步驟3 - 去除蛋白質
1.將100μl緩沖液PO加入樣品裂解液中并立即渦旋10秒,。
2.在冰上孵育5分鐘,。
3.以14-16,000xg離心3分鐘,。
4.將上清液轉移到干凈的1.5ml微量離心管中,。
切換步驟
◆如果需要更純的DNA，請切換到柱系統(tǒng)（DNA Pure）協(xié)議。

步驟4 - DNA沉淀
1.將300μl異丙醇加入到步驟3的樣品中，并通過反轉20次充分混合,。
2.以14-16,000xg離心5分鐘,。
3.棄去上清液，加入300μl70％乙醇洗滌沉淀,。
4.以14-16,000xg離心3分鐘,。
5.棄去上清液并將顆粒風干10分鐘。

步驟5 - DNA再水合
1.加入50-100μl緩沖液E,，在60℃下孵育5-10分鐘以溶解DNA沉淀,。在孵育期間，輕拍管底部以促進DNA再水合,。

柱系統(tǒng)（DNA Pure）方案

*在初次使用前,，向緩沖液W2中加入60ml無水乙醇。
*使用前將緩沖液E預熱至60°C,。

步驟1 - 樣品制備
1.將400μl緩沖液BD加入步驟3蛋白質去除的樣品中并劇烈搖動,。

步驟2 - DNA結合
1.將DG柱置于2 ml收集管中。
2.將樣品混合物從上一步驟轉移到DG色譜柱,。
3.以14-16,000 xg離心30秒,。
4.丟棄流通液并將DG柱放回2 ml收集管中。

步驟3 - 洗滌
1.將400μl緩沖液W1加入DG柱中,。
2.以14,000 xg離心30秒,。
3.丟棄流通液并將DG柱放回同一收集管中。
4.將600μl緩沖液W2（添加乙醇）加入DG柱中,。
5.以14,000 xg離心30秒,。
6.丟棄流通液并將DG柱放回同一收集管中。
7.再次以14,000xg離心2分鐘以除去殘留的緩沖液W2,。

步驟4 - DNA洗脫
1.將干燥的DG柱置于干凈的1.5 ml微量離心管中,。
2.將50-200μl預熱緩沖液E或TE（未提供）加入柱基質的中心。
3.將其在60℃下靜置5分鐘,。
4.以14-16,000xg離心2分鐘以洗脫純化的DNA,。

▍Gram-Postive細菌細胞

試劑系統(tǒng)協(xié)議

步驟1 - 樣品細胞收獲
1.將培養(yǎng)的細菌細胞（多10 ^ 9）轉移到無菌的1.5ml微量離心管中。
2.以12,000 xg離心1分鐘,。
3.*除去上清液,，通過移液沉淀將細胞重懸于100μl溶菌酶緩沖液中。
4.在室溫下孵育20分鐘,。
 

第2步 - 裂解

1.向步驟1的重懸浮細胞中加入300μlBufferCL,，并通過渦旋混合。
2.在60°C孵育10分鐘或直至樣品裂解液澄清,。在孵育期間,，每3分鐘倒置一次管。
可選步驟：RNA降解（如果需要無RNA基因組DNA,，則執(zhí)行此可選步驟,。）
3 ,。向樣品裂解液中加入5μlRNaseA（10 mg / ml）并通過渦旋混合。在室溫下孵育5分鐘,。

步驟3 - 去除蛋白質
1.將100μl緩沖液PO加入樣品裂解液中并立即渦旋10秒,。
2.在冰上孵育5分鐘。
3.以14-16,000xg離心3分鐘,。
4.將上清液轉移到干凈的1.5ml微量離心管中。
切換步驟
◆如果需要更純的DNA,，請切換到柱系統(tǒng)（DNA Pure）協(xié)議,。

步驟4 - DNA沉淀
1.將300μl異丙醇加入到步驟3的樣品中，并通過反轉20次充分混合,。
2.以14-16,000xg離心5分鐘,。
3.棄去上清液，加入300μl70％乙醇洗滌沉淀,。
4.以14-16,000xg離心3分鐘,。
5.棄去上清液并將顆粒風干10分鐘。

步驟5 - DNA再水合
1.加入50-100μl緩沖液E,，在60℃下孵育5-10分鐘以溶解DNA沉淀,。在孵育期間，輕拍管底部以促進DNA再水合,。

柱系統(tǒng)（DNA Pure）方案

*在初次使用前,，向緩沖液W2中加入60ml無水乙醇。
*使用前將緩沖液E預熱至60°C,。

步驟1 - 樣品制備
1.將400μl緩沖液BD加入步驟3蛋白質去除的樣品中并劇烈搖動,。

步驟2 - DNA結合
1.將DG柱置于2 ml收集管中。
2.將樣品混合物從上一步驟轉移到DG色譜柱,。
3.以14-16,000 xg離心30秒,。
4.丟棄流通液并將DG柱放回2 ml收集管中。

步驟3 - 洗滌
1.將400μl緩沖液W1加入DG柱中,。
2.以14,000 xg離心30秒,。
3.丟棄流通液并將DG柱放回同一收集管中。
4.將600μl緩沖液W2（添加乙醇）加入DG柱中,。
5.以14,000 xg離心30秒,。
6.丟棄流通液并將DG柱放回同一收集管中。
7.再次以14,000xg離心2分鐘以除去殘留的緩沖液W2,。

步驟4 - DNA洗脫
1.將干燥的DG柱置于干凈的1.5 ml微量離心管中,。
2.將50-200μl預熱緩沖液E或TE（未提供）加入柱基質的中心。
3.將其在60℃下靜置5分鐘,。
4.以14-16,000xg離心2分鐘以洗脫純化的DNA,。

▍真菌細胞

試劑系統(tǒng)協(xié)議

步驟1 - 樣品細胞收獲
1.將真菌細胞（多10 ^ 8）轉移到無菌的1.5ml微量離心管中,。
2.以6,000 xg離心5分鐘。
3.*除去上清液,，通過移液沉淀將細胞重懸于600μl山梨糖醇緩沖液中,。
4.加入200U裂解酶或酶解酶。在30°C孵育30分鐘,。
5.以2,000 xg離心混合物10分鐘以收獲原生質球,。
6.*除去上清液，通過移液沉淀將細胞重懸于50μlBufferRL中,。
 

步驟2 - 裂解
1.將300μl緩沖液CL加入來自步驟1的重懸浮細胞中并通過渦旋混合,。
2.在60°C孵育10分鐘或直至樣品裂解液澄清。在孵育期間,，每3分鐘倒置一次管,。
可選步驟：RNA降解（如果需要無RNA基因組DNA，則執(zhí)行此可選步驟,。）
3,。向樣品裂解液中加入5μlRNaseA（10 mg / ml）并通過渦旋混合。在室溫下孵育5分鐘,。
 

步驟3 - 去除蛋白質
1.將100μl緩沖液PO加入樣品裂解液中并立即渦旋10秒,。
2.在冰上孵育5分鐘。
3.以14-16,000xg離心3分鐘,。
4.將上清液轉移到干凈的1.5ml微量離心管中,。
切換步驟
◆如果需要更純的DNA，請切換到柱系統(tǒng)（DNA Pure）協(xié)議,。
 

步驟4 - DNA沉淀
1.將300μl異丙醇加入到步驟3的樣品中,，并通過反轉20次充分混合。
2.以14-16,000xg離心5分鐘,。
3.棄去上清液,，加入300μl70％乙醇洗滌沉淀。
4.以14-16,000xg離心3分鐘,。
5.棄去上清液并將顆粒風干10分鐘,。

步驟5 - DNA再水合
1.加入50-100μl緩沖液E，在60℃下孵育5-10分鐘以溶解DNA沉淀,。在孵育期間,，輕拍管底部以促進DNA再水合。

柱系統(tǒng)（DNA Pure）方案

*在初次使用前,，向緩沖液W2中加入60ml無水乙醇,。
*使用前將緩沖液E預熱至60°C。

步驟1 - 樣品制備
1.將400μl緩沖液BD加入步驟3蛋白質去除的樣品中并劇烈搖動,。

步驟2 - DNA結合
1.將DG柱置于2 ml收集管中,。
2.將樣品混合物從上一步驟轉移到DG色譜柱,。
3.以14-16,000 xg離心30秒。
4.丟棄流通液并將DG柱放回2 ml收集管中,。

步驟3 - 洗滌
1.將400μl緩沖液W1加入DG柱中,。
2.以14,000 xg離心30秒。
3.丟棄流通液并將DG柱放回同一收集管中,。
4.將600μl緩沖液W2（添加乙醇）加入DG柱中,。
5.以14,000 xg離心30秒。
6.丟棄流通液并將DG柱放回同一收集管中,。
7.再次以14,000xg離心2分鐘以除去殘留的緩沖液W2,。

步驟4 - DNA洗脫
1.將干燥的DG柱置于干凈的1.5 ml微量離心管中。
2.將50-200μl預熱緩沖液E或TE（未提供）加入柱基質的中心,。
3.將其在60℃下靜置5分鐘,。
4.以14-16,000xg離心2分鐘以洗脫純化的DNA,。