BioThema*專注于螢火蟲熒光素酶反應的分析應用,，無論是檢測細胞,，測量酶活性還是其他東西,。在該反應中，用ATP（三磷酸腺苷）活化熒光素,，然后氧化成氧化熒光素和CO 2,。氧化熒光素以激發(fā)態(tài)形成，并在進入其基態(tài)時發(fā)光,。通常在所謂的發(fā)光計中測量光。

ATP + 熒光素+ O 2 -熒光素酶 - > AMP +焦磷酸+氧化熒光素+ CO 2 +光

在ATP的測定中,，光發(fā)射可以基本上恒定或快速衰減,。因此，基于螢火蟲熒光素酶反應,，存在穩(wěn)定的光和閃光型ATP試劑,。在熒光素酶水平低的情況下，每分鐘消耗的ATP比例可以忽略不計,，然后光可以幾乎恒定但也很低,。在高水平的熒光素酶下，ATP被消耗是不可避免的,，導致光迅速減少,，但初峰值光很高。實際上,，峰高和衰減率都與熒光素酶活性成比例,。BioThema開發(fā)了三種ATP試劑

BioThema 266-112說明書

Microbial ATP Kit HS微生物ATP試劑盒HS

用于測定哺乳動物細胞中細菌細胞中的細胞內ATP

該試劑盒的靈敏度可以在各種情況下測定低ATP水平：
1。液體的細菌控制（如飲用水,，工藝用水,，飲料和啤酒）
2。藥品和化妝品
3.細胞與表面的粘附
4.質量保證洗衣
5.細菌生長,。
6.對細菌的抗生素作用

SKU：266-112

應用

該試劑盒用于測定微生物細胞中的細胞內ATP（三磷酸腺苷）,。大多數(shù)類型的體細胞，例如血細胞用中性洗滌劑裂解,。樣品中釋放的ATP和其他形式的細胞外ATP被酶促降解,。如果目的是確定細菌和體細胞中的細胞內ATP，我們建議不含裂解劑的266-111細胞內ATP試劑盒,。所有活細胞都含有ATP,，它在不同細胞過程之間起著能量貨幣的作用。當細胞死于自然原因時，ATP通常會降解,。在所有類型的細胞中,，小心地將ATP的細胞內濃度調節(jié)至相似水平。因此,，ATP是細胞內總體積的良好估計,。大多數(shù)細菌細胞含有大約。2×10 -18每個細胞的摩爾ATP,，而大多數(shù)真核細胞由于其較大的尺寸,，含有10-15摩爾ATP或更多。ATP生物質試劑盒HS,，細胞內ATP試劑盒HS和微生物ATP試劑盒HS含有具有高熒光素酶活性的ATP試劑HS（高靈敏度）,。ATP試劑HS中的熒光素酶活性實際上非常高，如果在重構過程中受到污染,，它將每38分鐘將ATP背景降低一個數(shù)量級,。混合樣品和ATP試劑HS后,，光強度衰減約,。每分鐘6％。這足夠慢以允許手動混合,，并且可以使用沒有試劑分配器的管發(fā)光計,。試劑的檢出限為10×10 -18使用靈敏的光度計測量ATP。這相當于5個細菌細胞,。我們必須在這里區(qū)分細菌細胞和CFU,，因為一個CFU可能由幾個細胞組成。如果檢測限不充分,，可以通過微濾濃縮樣品,，這一過程也可以去除細胞外ATP（請聯(lián)系BioThema獲取更多信息）。

儀器

可以使用任何管發(fā)光計,。應該注意的是,，管發(fā)光計比微孔板發(fā)光計靈敏度大約一個數(shù)量級。如果使用微孔板發(fā)光計,，它應該至少有兩個分配器,，并且應該能夠混合微孔板（參見測定程序）。

分析程序

詳細描述的程序可在“使用說明”中找到,，該說明書隨每個套件一起提供,。

產品特性

該試劑盒包含用于150-375測定的試劑（每個小瓶ATP試劑HS足以在管發(fā)光計中進行25次測定，在微孔板發(fā)光計中進行62.5次測定）,。

檢測限：

使用靈敏的發(fā)光計,，試劑的檢出限為10×10 -18 mol ATP,。

參考

1 Lundin，A,。（2000）在生物量,，酶和代謝物的ATP相關測定中使用螢火蟲熒光素酶。方法Enzymol,。305,346-370,。
2 Lundin，A,。（1999）ATP檢測生物污染,。在“30th R3-Nordic Contamination Control Symposium”（Eds.G.Wirtanen，S.Salo and A. Mikkola）,，VTT,，Espoo，F(xiàn)inland,，pp.337-352,。

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