BioThema*專注于螢火蟲熒光素酶反應(yīng)的分析應(yīng)用，無(wú)論是檢測(cè)細(xì)胞,，測(cè)量酶活性還是其他東西,。在該反應(yīng)中，用ATP（三磷酸腺苷）活化熒光素,，然后氧化成氧化熒光素和CO 2,。氧化熒光素以激發(fā)態(tài)形成，并在進(jìn)入其基態(tài)時(shí)發(fā)光,。通常在所謂的發(fā)光計(jì)中測(cè)量光,。

ATP + 熒光素+ O 2 -熒光素酶 - > AMP +焦磷酸+氧化熒光素+ CO 2 +光

在ATP的測(cè)定中,，光發(fā)射可以基本上恒定或快速衰減。因此,，基于螢火蟲熒光素酶反應(yīng),，存在穩(wěn)定的光和閃光型ATP試劑。在熒光素酶水平低的情況下,，每分鐘消耗的ATP比例可以忽略不計(jì),，然后光可以幾乎恒定但也很低。在高水平的熒光素酶下,，ATP被消耗是不可避免的，導(dǎo)致光迅速減少,，但初峰值光很高,。實(shí)際上，峰高和衰減率都與熒光素酶活性成比例,。BioThema開發(fā)了三種ATP試劑

BioThema 266-111說(shuō)明書 

SKU：266-111

Intracellular ATP Kit HS

細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)ATP的測(cè)定

該試劑盒的靈敏度允許在各種情況下測(cè)定低ATP水平,，條件是降解體細(xì)胞中的ATP并不重要：
1。液體的細(xì)菌控制（例如飲用水,，工藝用水,，飲料和啤酒）
2。藥品和化妝品
3.細(xì)胞與表面的粘合
4.洗衣的質(zhì)量保證
5.細(xì)菌生長(zhǎng),。
6.對(duì)細(xì)菌的抗生素作用

應(yīng)用

該試劑盒用于測(cè)定活細(xì)胞中的細(xì)胞內(nèi)ATP（三磷酸腺苷）,。樣品中的細(xì)胞外ATP被酶促降解。如果樣品還含有體細(xì)胞并且目的是確定微生物ATP,，我們建議使用266-112微生物ATP試劑盒,，包括用于大多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞的細(xì)胞裂解試劑。如果樣品中只有一種類型的細(xì)胞且沒(méi)有細(xì)胞外ATP,，則可以使用266-311 ATP生物質(zhì)試劑盒,。所有活細(xì)胞都含有ATP，它在不同細(xì)胞過(guò)程之間起著能量貨幣的作用,。當(dāng)細(xì)胞死于自然原因時(shí),，ATP通常會(huì)降解。在所有類型的細(xì)胞中,，小心地將ATP的細(xì)胞內(nèi)濃度調(diào)節(jié)至相似水平,。因此，ATP是細(xì)胞內(nèi)總體積的良好估計(jì),。大多數(shù)細(xì)菌細(xì)胞含有大約,。2×10-18 mol ATP /細(xì)胞，而大多數(shù)真核細(xì)胞由于其較大的尺寸,，含有10-15 mol或更多的ATP,。ATP生物質(zhì)試劑盒HS,，細(xì)胞內(nèi)ATP試劑盒HS和微生物ATP試劑盒HS含有具有高熒光素酶活性的ATP試劑HS（高靈敏度）。ATP試劑HS中的熒光素酶活性實(shí)際上非常高,，如果在重構(gòu)過(guò)程中受到污染,，它將每38分鐘將ATP背景降低一個(gè)數(shù)量級(jí)?；旌蠘悠泛虯TP試劑HS后,，光強(qiáng)度衰減約。每分鐘6％,。這足夠慢以允許手動(dòng)混合,，并且可以使用沒(méi)有試劑分配器的管發(fā)光計(jì)。試劑的檢出限為10×10 -18使用靈敏的光度計(jì)測(cè)量ATP,。這相當(dāng)于5個(gè)細(xì)菌細(xì)胞,。我們必須在這里區(qū)分細(xì)菌細(xì)胞和CFU，因?yàn)橐粋€(gè)CFU可能由幾個(gè)細(xì)胞組成,。如果檢測(cè)限不足,，則可以通過(guò)微濾濃縮樣品，該過(guò)程也將除去大部分細(xì)胞外ATP,。

儀器

可以使用任何管或微孔板發(fā)光計(jì),。應(yīng)該注意的是，管發(fā)光計(jì)比微孔板發(fā)光計(jì)靈敏度大約一個(gè)數(shù)量級(jí),。如果使用微孔板發(fā)光計(jì),，它應(yīng)該至少有兩個(gè)分配器，并且應(yīng)該能夠混合微孔板,。

分析程序

詳細(xì)描述的程序可在“使用說(shuō)明”中找到,，該說(shuō)明書隨每個(gè)套件一起提供。

產(chǎn)品特性

該試劑盒包含用于150-375測(cè)定的試劑（每個(gè)小瓶ATP試劑HS足以在管發(fā)光計(jì)中進(jìn)行25次測(cè)定,，在微孔板發(fā)光計(jì)中進(jìn)行62.5次測(cè)定）,。

檢測(cè)限：

使用靈敏的發(fā)光計(jì)1，試劑的檢出限為10×10-18 mol ATP ,。

參考

1 Lundin,，A。（2000）在生物量,，酶和代謝物的ATP相關(guān)測(cè)定中使用螢火蟲熒光素酶,。方法Enzymol。305,346-370,。
2 Lundin,，A。（1999）ATP檢測(cè)生物污染,。在“30th R3-Nordic Contamination Control Symposium”（Eds.G.Wirtanen,，S.Salo and A. Mikkola）,，VTT，Espoo,，F(xiàn)inland,，pp.337-352。

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