色譜保留時間漂移的故障排除
閱讀：817 發(fā)布時間：2013-1-17
保留時間不重現(xiàn)有兩種不同的情況：既保留時間漂移和保留時間波動,。前者是指保留時間僅沿單方向發(fā)生變化，而后者指保留時間無固定規(guī)律的波動,。將此兩種情況區(qū) 分開來對找到問題的原因往往很有幫助,。如，保留時間的漂移往往由柱老化引起,；而柱老化不可能引起保留時間的無規(guī)律波動,。事實(shí)上，保留時間漂移的多半原因是 不同機(jī)理的色譜柱老化,，如固定相流失（例如通過水解）,，色譜柱污染（由樣品或流動相所致）等。保留時間漂移的幾種zui常見的原因如下：
一 色譜柱平衡
如果我們觀察到保留時間漂移,，首先應(yīng)考慮色譜柱是否已用流動相*平衡,。通常平衡需要10-20個柱體積的流動相，但如果在流動相中加入少量添加劑（如離子對試劑）則需要相當(dāng)長的時間來平衡色譜柱,。
流動相污染也可能是原因之一。溶于流動相中的少量污染物可能慢慢富集到色譜柱上,，從而造成保留時間的漂移,。應(yīng)注意：水是很容易污染的流動相成分。
二 固定相穩(wěn)定性
固定相的穩(wěn)定性都是有限的,，即使在推薦的PH范圍內(nèi)使用,，固定相也會慢慢水解。例如，硅膠基質(zhì)在pH4時水解穩(wěn)定性,。水解速度與流動相類型和 配體有關(guān),。雙官能團(tuán)配體和三官能團(tuán)配體比單官能團(tuán)配體的鍵合相要穩(wěn)定；長鏈鍵合相比短鏈鍵合相穩(wěn)定,；烷基鍵合相比氰基鍵合相穩(wěn)定的多,。
經(jīng)常清洗色譜柱亦會加速色譜柱固定相的水解。其他硅膠基質(zhì)鍵合相在水溶液環(huán)境中也可以發(fā)生水解,，如氨基鍵合相等,。
三 色譜柱污染
保留時間漂移的另一個常見原因是色譜柱污染。HPLC色譜柱是非常有效的吸附性過濾器,，它可以過濾并吸附流動相攜帶的任何物質(zhì),。污染源可以是：流動相本身，流動相容器,，連接管,、泵、進(jìn)樣器和儀器密封墊,，以及樣品等,。通常通過實(shí)驗(yàn)可判斷污染的來源。
樣品中如果存在色譜柱上保留很強(qiáng)的組分,，就可能是使保留時間漂移的潛在根源,。這些根源通常是樣品基質(zhì)。如：配藥中的賦形劑,，生化樣品（如血清）中 的蛋白及類脂類化合物,，食品樣品中的淀粉，環(huán)境水樣中的腐殖酸等,。通常樣品中的強(qiáng)保留組分具有較高的分子量,，在此情況下，保留時間漂移的同時或其后會有反 壓的增加,?？梢酝ㄟ^使用固相提取（SPE）等樣品前處理方法來去除樣品基質(zhì)的影響,。
避免色譜柱污染zui簡單的方法是防患于未然,。相比之下，找到問題的所在并設(shè)計(jì)有效的清洗步驟以去除污染物要困難的多,。通常使用在給定色譜條件下的強(qiáng) 溶劑,，但并非所有污染物都可以在流動相中溶解。如THF可去除反相色譜柱中的許多污染物,，但蛋白在THF中就不能溶解,。DMSO常常用于去除反相色譜柱中 的蛋白,。
使用保護(hù)柱是個非常有效的方法。反沖色譜柱僅是不得已時采用的辦法,。
四 流動相組成
流動相組成的緩慢變化也是保留時間漂移的常見原因,。如流動相中易揮發(fā)組分的揮發(fā)及循環(huán)使用流動相等。
五 疏水坍塌
當(dāng)小孔徑,、端基封口良好的反相填料色譜柱使用接近100%的水為流動相時,，有時會發(fā)生分離突然喪失及被分析物質(zhì)保留明顯降低或*不保留的現(xiàn)象， 這就是疏水坍塌,。此現(xiàn)象是由流動相不浸潤固定相表面而致,。挽救的辦法實(shí)現(xiàn)用含大量有機(jī)組分的流動相浸潤固定相，再用高水含量的流動相進(jìn)行平衡,。由是色譜柱 長期儲存也會發(fā)生此現(xiàn)象,。使用內(nèi)嵌極性基團(tuán)的反相色譜柱（如Waters
SymmetryShield RP色譜柱）或非端基封口的色譜柱（如Waters Resolve色譜柱）也可避免發(fā)生坍塌。
21
立即詢價
您提交后,，專屬客服將第一時間為您服務(wù)