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 北京中諾泰安科技有限公司

程艷：      :

蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒快速檢測

酶抑制率法（分光光度法）試劑  使用說明

本試劑為國家標(biāo)準(zhǔn)快速檢驗方法GB/T5009.199-2003的配套試劑。酶活性和對農(nóng)藥的靈敏度指標(biāo)均達到或超過了國家標(biāo)準(zhǔn)要求,，可以在各種型號的農(nóng)藥殘毒檢測儀（分光光度法）上使用,，具有穩(wěn)定性好、靈敏度高和使用方便等特點,。

一,、試劑配制

1. 緩沖液試劑：整包倒入大燒杯中，加1000mL純凈水溶解,，酸堿度為pH8.0,，常溫保存；

2. 乙酰膽堿酯酶：取一支酶粉加20mL緩沖溶液溶解,，4℃冰箱中保存,，一周內(nèi)用完。也可將溶解后的酶液分成幾個小瓶，將其冷凍,，用時融化,，但不能重復(fù)多次冷凍、化解,。

3. 顯色劑：取一支顯色劑加入20mL緩沖溶液,，避光保存；

4. 底物：取一支底物加20mL緩沖溶液,，搖勻后置4℃冰箱中保存,；

二、分析步驟

1. 樣品處理：選取有代表性的蔬菜樣品,，沖洗掉表面泥土,，剪成1cm左右見方碎片，取樣品1g,，（非葉菜類取2g）放入燒杯或提取瓶中,，加入5mL緩沖溶液，手搖振蕩1～2分鐘,，或超聲波振蕩30秒鐘,，倒出提取液，靜置3~5min,，待用,。

2. 對照溶液測試： 先于試管中加入100微升酶液和100微升顯色劑，再加入2.5mL緩沖溶液,，搖勻后于37°C放置15min,，加入100微升底物搖勻，此時檢液開始顯色反應(yīng),，應(yīng)立即放入儀器比色池中,，記錄初始吸光度A₁和反應(yīng)3 min時的吸光度A₂，A₂-A₁=DA₀,。

3.樣品溶液測試：先于試管中加入100微升酶液和100微升顯色劑,，再加入2.5mL樣品提取液，其它操作與對照溶液測試相同,，記錄初始吸光度A₁和反應(yīng)3 min時的吸光度A₂,，A₂-A₁=DA_t。

三,、結(jié)果計算

結(jié)果以酶被抑制的程度（抑制率）表示,。

抑制率（%）=[ （DA₀-DA_t）/ DA₀]×100 

當(dāng)蔬菜樣品提取液對酶的抑制率≥50%時,，表示蔬菜中有高劑量有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥存在,，樣品為陽性結(jié)果。陽性結(jié)果的樣品需要重復(fù)檢驗2次以上。

對陽性結(jié)果的樣品,，可用其它方法進一步確定具體農(nóng)藥品種和含量,。

四、注意

1. 每批樣品的控制時間,、溫度條件必須與對照溶液的條件**,。

2. 蔥、蒜,、蘿卜,、韭菜、芹菜,、香菜,、茭白、蘑菇及番茄汁液中,，含有對酶有影響的植物次生物質(zhì),，容易產(chǎn)生假陽性。處理這類樣品時,，不要剪的太碎,。對一些含葉綠素較高的蔬菜，也不要剪的太碎,。

3. 當(dāng)溫度條件低于37°C,，酶反應(yīng)的速度隨之放慢，加入酶液和顯色劑后放置反應(yīng)的時間應(yīng)相對延長,，延長時間的確定,，應(yīng)以膽堿酯酶對照溶液測試得到的吸光度A₂-A₁≥ 0.3以上，即可往下操作,。當(dāng)對照溶液酶液的加入量大一些時,，也可使A₂-A₁≥0.3以上。

4. 當(dāng)吸光度大到無法讀取時,，說明測定液渾濁有干擾,。

五、產(chǎn)品有關(guān)技術(shù)指標(biāo)

1. 代表性農(nóng)藥的檢出下限見下表

2. 乙酰膽堿酯酶的活性：（室溫20°C以上進行實驗）DA₀≥0.3,。

六,、包裝及保存條件

每包可做200份樣品，0°C以下冰箱冷凍保質(zhì)期為三年,，配成試劑后保存期為一周