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大腸埃希氏菌和耐熱大腸菌群測試片使用說明書

 1.適用范圍：適用于各種水樣中大腸埃希氏菌和耐熱大腸菌群的快速檢驗

2.方法原理：耐熱大腸菌群（thermotoletant coliform  bacteria）是總大腸菌群的一部分．將培養(yǎng)溫度提高到44～45℃,，在此條件下仍能生長和發(fā)酵乳糖的菌群被稱為耐熱大腸菌群,。它們由埃希氏菌屬以及克雷伯菌屬、腸桿菌屬和檸檬酸桿菌屬中的一些菌種組成。其中大腸埃希氏菌（E.coli） 是zui準確和專一的糞便污染指示菌。與總大腸菌群相比，耐熱大腸菌群在水體中的檢出,，說明水體更為不清潔，存在腸道致病菌和食物中毒菌的可能性更大,。大腸埃希氏菌耐熱大腸菌群測試片運用酶底物技術(shù),，含有大腸埃希氏菌*葡萄糖醛酸酶（glucuronidase）的顯色底物（XGLUC/blue），以及耐熱大腸菌群半乳糖苷酶（galactosidase）的顯色底物（SalmonGal/red）, 經(jīng)過44.5℃培養(yǎng)后,，大腸埃希氏菌顯紫藍色,，紅色或紫藍色菌斑都屬耐熱大腸菌群。
3 操作方法

3.1對于大腸菌群檢驗顯示陽性的紙片或產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管,，用接種環(huán)挑取菌液,，轉(zhuǎn)入2－3mL無菌水中混勻，用滅菌吸管吸取1mL慢慢均勻地滴加到大腸埃希氏菌耐熱大腸菌群測試片上,，然后放下上層膜,，靜置5 min使培養(yǎng)基凝固，zui后用手輕輕地壓一下,。

3.2將接種好的紙片平放于培養(yǎng)箱中,，44.5℃培養(yǎng)15～24h觀察結(jié)果。

4 結(jié)果判讀: 測試片上出現(xiàn)紅色或紫藍色菌斑都是耐熱大腸菌群陽性,，其中紫藍色為大腸埃希氏菌陽性,。沒有紅色或紫藍色斑點為陰性結(jié)果。

十,、致病菌檢測試劑盒使用說明

1適用范圍：適用于生活飲用水,、水源水及食品中致病性沙門氏菌、金黃色葡萄球菌,、副溶血弧菌、致瀉大腸埃希氏菌（含腸出血性大腸桿菌O157:H7）,、臘樣芽孢桿菌,、板奇腸桿菌檢測的檢測以及大腸菌群污染程度的檢測。

2方法原理：依據(jù)國標GB/T4789.3.4.5.6.7.10.14-2003方法,，采用包被技術(shù)將相對應(yīng)培養(yǎng)基包被在試劑盒底部,，隨時取用。

3樣品稀釋：同國標法,。液體樣品取原液,。固體或半固體樣品用滅菌生理鹽水配制成1:10和1:100的稀釋液。

4 致病菌檢測

4.1加樣：用滅菌吸管吸取原液或1:10樣品稀釋液4ml～10 ml（不得少于4ml）分別加入到標號為1,、2,、3,、A、B,、C的增菌格（孔）內(nèi),。加樣后的1、2,、3號分別為副溶血弧菌,、致瀉大腸埃希菌、板奇腸桿菌增菌液,；A,、B、C分別為金黃色葡萄球菌,、沙門菌,、臘樣芽孢桿菌增菌液。

4.2培養(yǎng)：將加樣后的試劑盒蓋上蓋,，平放在36℃±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18小時,。

4.3 觀察結(jié)果：如果某致病菌的增菌液發(fā)生渾濁，即預(yù)示含有此種致病菌,?？砂磭鴺朔ㄟM一步檢測。也可取陽性菌液1mL,，加入到含有9 mL滅菌生理鹽的試管內(nèi),，混勻，取1mL,，接種到相對應(yīng)的測試片上,，36℃±1℃培養(yǎng)18小時加以驗證。

5大腸菌檢測

5.1加樣：將試劑盒放在試驗臺面上,，打開盒蓋,，用滅菌吸管分別吸取3個原液或1:10樣品稀釋液1ml加到標號為4、5,、6的小培養(yǎng)基孔內(nèi),。另用滅菌吸管分別吸取3個1:10或1:100的樣品稀釋液1ml加到標號為7、8,、9的小培養(yǎng)基孔內(nèi),，標號為10的小培養(yǎng)基孔內(nèi)可加入1ml滅菌生理鹽水作為培養(yǎng)基陰性對照孔使用。

5.2排氣泡：加樣后集氣窗內(nèi)如有氣泡存在,，可將試劑盒以30～45度角傾斜使氣泡排出,，必要時可輕輕用力在桌面上敲擊數(shù)下排出氣泡。

5.3培養(yǎng)：將加樣后的試劑盒蓋上蓋,，平放在36℃±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18～24小時,。

5.4觀察結(jié)果：樣液變?yōu)辄S色為產(chǎn)酸,、集氣窗中有氣泡為產(chǎn)氣，產(chǎn)酸產(chǎn)氣者為陽性結(jié)果,，陽性結(jié)果的孔數(shù)越多,，說明污染越嚴重。

6 注意事項

6.1致病菌檢測與大腸菌檢測可同時進行,；加入樣品后不需搖勻,；大腸菌檢測培養(yǎng)前一定要排氣泡，排氣泡的方法與結(jié)果觀察可參見大腸菌試劑盒使用說明中的圖像顯示,；在培養(yǎng)箱中取試劑盒時注意平托出來,，避免由于試劑盒的傾斜使大腸菌陽性集氣窗中的氣泡流失而影響結(jié)果判斷。

6.2試劑盒為一次性無菌包裝用品,，供一次性即開即用,，。

7 保存條件和有效期：避光保存于陰涼干燥處,，*溫度為2～8℃,，有效期18個月。