對(duì)于每天泡在實(shí)驗(yàn)室的人來說,,qPCR已是家常便飯。毫無疑問濃度高,,純度好,,片段完整,才是我們理想中的RNA樣品,。然而,,RNA總是嬌氣的存在!室溫或4度極易降解,,提取的時(shí)候容易有污染物殘留,。因此完整的RNA質(zhì)控包含了三個(gè)方面:濃度質(zhì)控,純度質(zhì)控,,片段完整性質(zhì)控,。
如何把控RNA質(zhì)量,繼續(xù)反轉(zhuǎn)錄呢,?
有一款RNA質(zhì)控的高手,,既可以提供RNA濃度質(zhì)控,也可以提供RNA純度質(zhì)控,,沒錯(cuò),,就是美國Denovix公司提供的DS-11FX超微量紫外/熒光全功能分光光度計(jì),看上去酷酷的
RNA純度質(zhì)控的標(biāo)準(zhǔn)方法是超微量分光光度計(jì)(光吸收)法,,通過監(jiān)控A260/230和A260/280的比值來判定RNA的純度,。通常A260/280的比值范圍在1.8-2.0之間,,如果大于2.0則說明RNA已經(jīng)降解,如果低于1.8則說明含有蛋白質(zhì)或其他雜質(zhì),;而A260/230的比值如果小于2,,則表明RNA中含有酚類,鹽等雜質(zhì),。DS-11FX的微量光度計(jì)功能可以幫助科研人員來準(zhǔn)確的判定RNA樣品的純度,。
下圖為RNA紫外法檢測示意圖,A260/280和A260/230都不在正常的比值范圍,,說明RNA樣品純度很差,,儀器會(huì)自動(dòng)進(jìn)行提示,兩個(gè)黃色小三角就是警示圖標(biāo)哦,,點(diǎn)擊萌萌的黃色三角警示,,儀器會(huì)顯示污染物的種類,夠智能吧,,這就是DS-1有的SmartQC功能
RNA濃度質(zhì)控的標(biāo)準(zhǔn)方法是熒光法,,除非是純度很高的RNA也可以采用紫外法。熒光法采用RNA特異性染料,,可以準(zhǔn)確的測量RNA濃度,。DS-11FX不但提供RNA濃度質(zhì)控,也可以提供DNA和蛋白的濃度精確控制,,功能超級(jí)強(qiáng)大哦,。