微量分光光度計(jì)能夠快速準(zhǔn)確的定量檢測(cè)核酸,、蛋白質(zhì)等溶液。具有使用方便,、消耗樣品少(僅2μl),、不用預(yù)熱,、能迅速清理殘留樣品、不需要比色皿或其它樣品定位裝置,、樣品不需要稀釋等特點(diǎn),，常用于核酸，蛋白定量以及細(xì)菌生長(zhǎng)濃度的定量,，目前已成為眾多實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)儀器,。

工作原理

超微量分光光度計(jì)進(jìn)行濃度測(cè)定的原理是根據(jù)朗伯-比爾（Lamber-Beer）定律，

A＝K·C·L

式中,，A為吸光度；K為吸（消）光系數(shù),；C為溶液的濃度,；L為液層厚度。此公式說明：在入射光一定時(shí),，溶液的吸光度與溶液的濃度及液層厚度成正比,。此式就是光的吸收定律的數(shù)學(xué)表達(dá)式，又叫朗伯-比爾定律,。

核酸定量

核酸的定量是超微量分光光度計(jì)使用頻率最高的功能,。可以定量測(cè)定溶于緩沖液的寡核苷酸,，單鏈,、雙鏈DNA以及RNA含量。這是由于核酸,、核苷酸及其衍生物都具有共軛雙鍵,，具有紫外吸收的特性，最大的吸收波長(zhǎng)在260nm,，吸收波谷在230nm,。

除了核酸濃度，分光光度計(jì)同時(shí)顯示幾個(gè)非常重要的比值表示樣品的純度,，如A260/A280的比值,，用于評(píng)估樣品的純度，因?yàn)榈鞍椎奈辗迨?80nm,。純凈的樣品,，比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8 或者2.0,，表示存在蛋白質(zhì)或者酚類物質(zhì)的影響,。A230表示樣品中存在一些污染物，如碳水化合物,，多肽,，苯酚等,，較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0。

蛋白質(zhì)直接定量

這種方法是在280nm波長(zhǎng),，直接測(cè)試蛋白,。蛋白質(zhì)直接定量方法，適合測(cè)試較純凈,、成分相對(duì)單一的蛋白質(zhì),。紫外直接定量法相對(duì)于比色法來說，速度快,，操作簡(jiǎn)單,；但是容易受到平行物質(zhì)的干擾，如DNA的干擾,；另外敏感度低,，要求蛋白的濃度較高。

比色法蛋白質(zhì)定量

蛋白質(zhì)通常是多種蛋白質(zhì)的化合物,，比色法測(cè)定的基礎(chǔ)是蛋白質(zhì)構(gòu)成成分：氨基酸（如酪氨酸,，絲氨酸）與外加的顯色基團(tuán)或者染料反應(yīng)，產(chǎn)生有色物質(zhì),。有色物質(zhì)的濃度與蛋白質(zhì)反應(yīng)的氨基酸數(shù)目直接相關(guān),，從而反應(yīng)蛋白質(zhì)濃度。

微量分光光度計(jì)工作原理

會(huì)員登錄

收藏該商鋪

提示