巴玖講解酶標儀的選擇,、自檢和校準
酶標儀的自檢和校準從上述所獲的酶標儀性能的有關信息資料,基本上可以說是間接的,,有了目標以后,,如果還想獲得對某一酶標儀的感性認識,可以對其進行自檢,,主要有下述幾個方面,。
(一)外觀
酶標儀上應有儀器名稱,型號,,編號,,生產(chǎn)廠家,出廠日期和電源電壓,;各調(diào)節(jié)旋鈕,,按鍵和開關均能正常工作,外表面無明顯機械損傷,;顯示文字應清楚完整,。
(二)酶標儀的穩(wěn)定性(漂移)
選用492nm波長,在吸光度o.0A處,,測定標稱值為1.0A的光譜中性濾光片(測定操作按儀器說明進行),,記錄儀器示值或均值,10min后再次記錄儀器示值或均值,,前后兩次測定值之差不應*過±0.00,。
(三)吸光度測定的準確度
選用405,492和620 nm波長,以空氣為參比,,分別測定標稱值為0.5和1.0A的光譜中性玻璃濾光片,,用測試板代替酶標板,按儀器說明連續(xù)測定3次,,按下式計算準確度:AA=1/3(A,、+A。+A3)—A:(A:為標準值),。
(四)吸光度測定的重復性
波長選擇同(3),,在酶標板排加注空白溶液,第二排加入濃度為200rig/ml的重鉻酸鉀溶液,,重復測定5次,。記錄每次測定的第二排吸光度值,取第二排任一孔吸光度值與各次對應孔吸光度值,。按下式計算重復性:
(五)酶標儀的線性
選用540nm波長,,將標稱值o.5,1.0A中性濾光片分別放入測試板樣本位置中,,以空氣為參比,,各重復測定3次;然后將以上兩片中性濾光片疊加后置于測試板的同一孔位中,,重復測定3次,。線性誤差:
式中A1為片中性濾光片吸光度均值,A:為第二片中性濾光片吸光度均值,,A1,,2為兩片中性濾光片疊加后的吸光度均值。
(六)測定速度的檢定 .
選用492nm波長,,放人96孔酶標板進行測定,,用秒表計測儀器打印出全部數(shù)據(jù)的時間。
酶標儀除了在選購時,,應盡可能自檢外,,在使用中也應定期檢定,以保證酶標儀測定的有效性,。
附:200ttg/ml重鉻酸鉀溶液的配制
將重鉻酸鉀固體試劑放人稱量瓶中(去蓋)置于烘箱中,,在105±5℃下烘2h后,置于干燥器內(nèi)冷卻30min,,在分析天平上準確稱取o.2829g,置于100ml燒杯中,,用o.05mol/L稀硫酸溶解后,,移入500ml容量瓶中,以少量o.05mol/L稀硫酸洗燒杯3次,洗液并入容量瓶中,,用0.05mol/L稀硫酸稀釋至刻度線,,搖勻。