酶標(biāo)儀的自檢和校準(zhǔn)從上述所獲的酶標(biāo)儀性能的有關(guān)信息資料,,基本上可以說是間接的,有了目標(biāo)以后,,如果還想獲得對(duì)某一酶標(biāo)儀的感性認(rèn)識(shí),,可以對(duì)其進(jìn)行自檢,主要有下述幾個(gè)方面,。
(一)外觀
酶標(biāo)儀上應(yīng)有儀器名稱,,型號(hào),編號(hào),,生產(chǎn)廠家,,出廠日期和電源電壓;各調(diào)節(jié)旋鈕,,按鍵和開關(guān)均能正常工作,,外表面無明顯機(jī)械損傷;顯示文字應(yīng)清楚完整,。
(二)酶標(biāo)儀的穩(wěn)定性(漂移)
選用492nm波長,,在吸光度o.0A處,測定標(biāo)稱值為1.0A的光譜中性濾光片(測定操作按儀器說明進(jìn)行),,記錄儀器示值或均值,,10min后再次記錄儀器示值或均值,前后兩次測定值之差不應(yīng)*過±0.00,。
(三)吸光度測定的準(zhǔn)確度
選用405,,492和620 nm波長,以空氣為參比,,分別測定標(biāo)稱值為0.5和1.0A的光譜中性玻璃濾光片,,用測試板代替酶標(biāo)板,,按儀器說明連續(xù)測定3次,按下式計(jì)算準(zhǔn)確度:AA=1/3(A,、+A,。+A3)—A:(A:為標(biāo)準(zhǔn)值)。
(四)吸光度測定的重復(fù)性
波長選擇同(3),,在酶標(biāo)板排加注空白溶液,,第二排加入濃度為200rig/ml的重鉻酸鉀溶液,重復(fù)測定5次,。記錄每次測定的第二排吸光度值,,取第二排任一孔吸光度值與各次對(duì)應(yīng)孔吸光度值。按下式計(jì)算重復(fù)性:
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(五)酶標(biāo)儀的線性
選用540nm波長,,將標(biāo)稱值o.5,,1.0A中性濾光片分別放入測試板樣本位置中,以空氣為參比,,各重復(fù)測定3次,;然后將以上兩片中性濾光片疊加后置于測試板的同一孔位中,重復(fù)測定3次,。線性誤差:
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式中A1為片中性濾光片吸光度均值,,A:為第二片中性濾光片吸光度均值,A1,,2為兩片中性濾光片疊加后的吸光度均值,。
(六)測定速度的檢定 .
選用492nm波長,放人96孔酶標(biāo)板進(jìn)行測定,,用秒表計(jì)測儀器打印出全部數(shù)據(jù)的時(shí)間,。
酶標(biāo)儀除了在選購時(shí),應(yīng)盡可能自檢外,,在使用中也應(yīng)定期檢定,,以保證酶標(biāo)儀測定的有效性。
附:200ttg/ml重鉻酸鉀溶液的配制
將重鉻酸鉀固體試劑放人稱量瓶中(去蓋)置于烘箱中,,在105±5℃下烘2h后,,置于干燥器內(nèi)冷卻30min,在分析天平上準(zhǔn)確稱取o.2829g,,置于100ml燒杯中,用o.05mol/L稀硫酸溶解后,,移入500ml容量瓶中,,以少量o.05mol/L稀硫酸洗燒杯3次,洗液并入容量瓶中,,用0.05mol/L稀硫酸稀釋至刻度線,,搖勻,。