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CR:聚合酶鏈式反應,。是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術,它可看作是生物體外的特殊DNA復制,PCR的特點,,是能將微量的DNA大幅增加,。
PCR原理示意圖:
PCR儀的種類有:常規(guī)的普通PCR儀,梯度PCR儀,,原位PCR儀,,實時熒光定量PCR儀四類!
1,、普通PCR儀
一般把一次PCR擴增只能運行一個特定退火溫度的PCR儀,,稱之為普通PCR儀,也就是傳統(tǒng)的PCR儀,。如果要用它做不同的退火溫度則需要多次運行,。
普通PCR儀主要應用于科研、教學,、臨床醫(yī)學,、檢驗、檢疫等,。
2,、梯度PCR儀:
一次性PCR擴增可以設置一系列不同的退火溫度條件(通常12種溫度梯度)的稱之為梯度PCR儀。不同的DNA片段其適合的退火溫度不同,,通過設置一系列的梯度退火溫度進行擴增,,從而一次性PCR擴增就可以篩選出表達量高的適合退火溫度進行有效的擴增。
梯度PCR儀主要用于研究未知DNA退火溫度的擴增,,這樣既節(jié)約時間,,也節(jié)約成本。在不設置梯度的情況下亦可當做普通的PCR用,。梯度PCR儀多應用于科研,、教學機構等。
3,、實時熒光定量PCR儀
在普通PCR儀設計基礎上增加熒光信號激發(fā)和采集系統(tǒng)和計算機分析處理系統(tǒng),,形成了具有熒光定量PCR功能的儀器。其PCR擴增原理和普通PCR擴增原理相同,,在PCR擴增時加入的引物是利用同位素,、熒光素等進行標記,使用引物和熒光探針同時與模板特異性結合擴增,。擴增的結果通過熒光信號采集系統(tǒng)實時采集信號連接輸送到計算機分析處理系統(tǒng),,得出量化的實時結果輸出。
熒光定量PCR儀有單通道,,雙通道和多通道之分,。當只用一種熒光探針標記的時候,,選用單通道;有多種熒光標記的時候使用多通道,。單通道也可以檢測多熒光的標記和目的基因表達產(chǎn)物,,因為一次只能檢測一種目的基因的擴增量,需多次擴增才能檢測完不同的目的基因片段的量,。多通道利于做多重PCR,,實現(xiàn)一次檢測多種目的基因的功能。
實時熒光定量PCR儀的應用:(1)動物疾病檢測:禽流感,、口蹄疫,、豬瘟、沙門菌,、大腸埃希菌,、胸膜肺炎放線桿菌、寄生蟲病等,、炭疽芽孢桿菌,。(2)食品安全:食源微生物、食品過敏源,、轉基因,、乳品企業(yè)阪崎腸桿菌等檢測。(3)科學研究:醫(yī)學,、農(nóng)牧,、生物相關分子生物學定量研究、大學及研究所等,。
4,、原位PCR儀:
是用于從細胞內靶DNA的定位分析的細胞內基因擴增儀。如病原基因在細胞的位置或目的基因在細胞內的作用位置等,??杀3旨毎蚪M織的完整性,使PCR反應體系滲透到組織和細胞中,,在細胞的靶DNA所在的位置進行基因擴增,。不但可以檢測到靶DNA,還能標出靶序列在細胞內的位置,。于分子和細胞水平上研究疾病的發(fā)病機理和臨床過程及病理的轉變有著重大的實用價值,。
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