“人巨噬細(xì)胞炎性蛋白2"由上海恒遠(yuǎn)生物專業(yè)提供,，有96T和48T兩種規(guī)格,，包括96/48孔酶標(biāo)包被板、酶標(biāo)試劑,、樣品稀釋液,、顯色劑AB液、標(biāo)準(zhǔn)品,、濃縮洗滌液,封板膜,說(shuō)明書等,。

科研ELISA檢測(cè)試劑盒.本公司可提供實(shí)驗(yàn)代測(cè)服務(wù).
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產(chǎn)品名稱：人巨噬細(xì)胞炎性蛋白2    
英文名稱：Human macrophage inflammatory protein 2,MIP-2 ELISA KIT

產(chǎn)品規(guī)格：96人份/48人份
各種種屬：人,、大小鼠、豚鼠,、兔子,、豬、犬,、牛,、羊…
標(biāo)本齊全：血清、血漿,、細(xì)胞培養(yǎng)上清液,、組織勻漿、組織液,、關(guān)節(jié)液,、胸腔溢液等…
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：2-8℃。
2．有效期：6個(gè)月
運(yùn)輸條件低溫運(yùn)輸,，用干冰或者冰袋低溫運(yùn)輸,。

巨噬細(xì)胞（Macrophages）能夠吞沒(méi)、破壞受損傷組織,，有助于啟動(dòng)康復(fù)過(guò)程,。雖然它們?cè)趽p傷位點(diǎn)發(fā)揮關(guān)鍵作用，但一旦任務(wù)完成,，就需要盡快撤離,，結(jié)束炎癥反應(yīng)，為再生過(guò)程開(kāi)路,。繼續(xù)存在的巨噬細(xì)胞不利于組織恢復(fù),。

盡管研究人員對(duì)于啟動(dòng)巨噬細(xì)胞的分子機(jī)制研究的比較透徹，但關(guān)于其退出損傷位點(diǎn)的過(guò)程還了解甚少,。研究人員鑒別出一清除外周神經(jīng)損傷位點(diǎn)巨噬細(xì)胞的關(guān)鍵環(huán)節(jié),，對(duì)弄清脊髓損傷、中風(fēng)和多發(fā)性硬化中相似的分子機(jī)制提供了重要線索,。已知Nogo細(xì)胞受體家族與神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)有關(guān),，SamuelDavid等觀測(cè)Nogo家族成員NgR1的作用。NgR1類受體是位于細(xì)胞膜上的蛋白開(kāi)關(guān),，受到特異化學(xué)信號(hào)或配體刺激后,，誘導(dǎo)細(xì)胞反應(yīng)。

　　破壞大鼠,、小鼠的大腿坐骨神經(jīng),，觀察NgR1在修復(fù)過(guò)程中的作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)巨噬細(xì)胞到達(dá)損傷位點(diǎn)后，細(xì)胞表面會(huì)表達(dá)NgR1,。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),，受損神經(jīng)合成髓磷脂時(shí)，NgR1不僅阻止巨噬細(xì)胞與髓磷脂結(jié)合,，而且直接排斥正在形成過(guò)程中的髓磷脂,，若抑制髓磷脂再生，巨噬細(xì)胞會(huì)停留在損傷位點(diǎn)周圍,。zui終，研究人員在髓磷脂上鑒別出特異激發(fā)排斥反應(yīng)的分子,?？蓱?yīng)用于外周神經(jīng)以外的神經(jīng)（中樞神經(jīng)），他們發(fā)現(xiàn)中風(fēng),、多發(fā)性硬化和脊髓損傷過(guò)程中激活的巨噬細(xì)胞,，表面都會(huì)表達(dá)NgR1。
ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定（ Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay ）的簡(jiǎn)稱,。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來(lái)的一種免疫酶技術(shù),。此項(xiàng)技術(shù)自70年代初問(wèn)世以來(lái)，發(fā)展十分迅速,，目前已被廣泛用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的許多領(lǐng)域,。 　　
（一）原理
　　ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原,、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù),。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行,，每加入一種試劑孵育后,，可通過(guò)洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性,。在實(shí)際應(yīng)用中,，通過(guò)不同的設(shè)計(jì)，具體的方法步驟可有多種,。即:用于檢測(cè)抗體的間接法（圖a）,、用于檢測(cè)抗原的雙抗體夾心法（圖b）以及用于檢測(cè)小分子抗原或半抗原的抗原競(jìng)爭(zhēng)法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法,。 　　
（二）操作步驟
     方法一　用于檢測(cè)未知抗原的雙抗體夾心法:
　　1.　包被：用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg／ml,。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃過(guò)夜,。次日,，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次,，每次3分鐘,。（簡(jiǎn)稱洗滌,，下同）。
　　2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,，置37℃孵育1小時(shí),。然后洗滌。（同時(shí)做空白孔,，陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔）,。
　　3.　加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml,。37℃孵育0.5～1小時(shí),，洗滌。
　　4.　加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,，37℃10～30分鐘,。
　　5.　終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
　　6.　結(jié)果判定：可于白色背景上,，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,，依據(jù)所呈顏色的深淺,，以“+”、“-”號(hào)表示,。也可測(cè)O?D值：在ELISA檢測(cè)儀上,，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處,，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔O?D值,，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性,。
　　方法二　用于檢測(cè)未知抗體的間接法：　　　
1,、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml，每孔加0.1ml,，4℃過(guò)夜,。
2、次日洗滌3次,。加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌,。同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照于反應(yīng)孔中,，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1ml,，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,zui后一遍用DDW（超純水）洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4,、5,、6。
3.　加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,，37℃10～30分鐘,。
4.　終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
5.　結(jié)果判定：可于白色背景上,，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,，依據(jù)所呈顏色的深淺,，以“+”、“-”號(hào)表示,。也可測(cè)O?D值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm（若以ABTS顯色,，則410nm）處,，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔O?D值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,，即為陽(yáng)性,。

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