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詳細(xì)介紹
科研ELISA檢測試劑盒.本公司可提供實驗代測服務(wù).
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產(chǎn)品名稱：人髓磷脂堿性蛋白
英文名稱：Human myelin basic protein,MBP ELISA KIT
產(chǎn)品規(guī)格：96人份/48人份
各種種屬：人、大小鼠,、豚鼠,、兔子、豬,、犬,、牛、羊…
標(biāo)本齊全：血清,、血漿,、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿,、組織液,、關(guān)節(jié)液、胸腔溢液等…
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：2-8℃,。
2．有效期：6個月
運輸條件低溫運輸,，用干冰或者冰袋低溫運輸,。
腦脊液髓鞘堿性蛋白（myelin basic protein in CSF ）
【參考范圍】
比色法：0～4μg/L。
【影響因素】
1．標(biāo)本不宜污染,。
2．如不能及時處理,，應(yīng)冷凍保存,。
【臨床意義】
1．正常CSF中骨髓鞘堿性蛋白（MBP）含量極微,，MBP中的脂質(zhì)與蛋白質(zhì)含量分別占70％與30％。檢測其在CSF中的含量,，對脫髓鞘病的診斷及探索其病因有一定價值,。
2.MBP增高主要見于多發(fā)性硬化癥。多發(fā)性硬化癥的急性期都表現(xiàn)為MBP明顯增高,，慢性活動者,，約50％有MBP升高，但非活動者不增高,。此外,；MBP增高也可見于其他脫髓鞘病，如橫貫性脊髓炎合并系統(tǒng)性紅斑狼瘡,、腦橋中心髓質(zhì)溶解癥及甲氨蝶呤髓病等,。
3．結(jié)合CSF中酶學(xué)及IgG測定，可提高對多發(fā)性硬化癥的診斷以及病程,、療效等的觀察,。
ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定（ Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay ）的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù),。此項技術(shù)自70年代初問世以來,，發(fā)展十分迅速，目前已被廣泛用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的許多領(lǐng)域,。
（一）原理
ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù),。由于抗原,、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后,，可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物,，從而保證試驗結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。在實際應(yīng)用中,，通過不同的設(shè)計,，具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測抗體的間接法（圖a）,、用于檢測抗原的雙抗體夾心法（圖b）以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等,。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法,。
（二）操作步驟
方法一 用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:
1. 包被：用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg／ml。在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,，4℃過夜,。次日，棄去孔內(nèi)溶液,，用洗滌緩沖液洗3次,，每次3分鐘。（簡稱洗滌,，下同）,。
2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃孵育1小時,。然后洗滌,。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）,。
3. 加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中,，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃孵育0.5～1小時,，洗滌,。
4. 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘,。
5. 終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml,。
6. 結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,，陽性程度越強(qiáng),，陰性反應(yīng)為無色或極淺,，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”,、“-”號表示。也可測O?D值：在ELISA檢測儀上,，于450nm（若以ABTS顯色,，則410nm）處,，以空白對照孔調(diào)零后測各孔O?D值,，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,，即為陽性,。
方法二 用于檢測未知抗體的間接法：
1,、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml,，每孔加0.1ml，4℃過夜,。
2,、次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌,。同時做空白,、陰性及陽性孔對照于反應(yīng)孔中,，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1ml,，37℃孵育30-60分鐘,，洗滌,zui后一遍用DDW（超純水）洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4,、5,、6。
3. 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,，37℃10～30分鐘,。
4. 終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml,。
5. 結(jié)果判定：可于白色背景上,，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng),，陰性反應(yīng)為無色或極淺,，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”,、“-”號表示。也可測O?D值：在ELISA檢測儀上,，于450nm（若以ABTS顯色,，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔O?D值,，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,，即為陽性,。
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