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科研ELISA檢測試劑盒.本公司可提供實驗代測服務(wù).
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產(chǎn)品名稱:人β淀粉樣蛋白1-40
英文名稱:Human amyloid beta peptide 1-40,Aβ1-40 ELISA KIT
產(chǎn)品規(guī)格:96人份/48人份
各種種屬:人,、大小鼠、豚鼠,、兔子,、豬、犬,、牛,、羊…
標本齊全:血清、血漿,、細胞培養(yǎng)上清液,、組織勻漿、組織液,、關(guān)節(jié)液,、胸腔溢液等…
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:2-8℃,。
2.有效期:6個月
運輸條件低溫運輸,用干冰或者冰袋低溫運輸,。
Beta-amyloid production results from cleavage in the extracellular domain of APP by the beta-secretase (BACE1) , which results in the production of the APP C-terminal fragment C99. This fragment is further cleaved by the gamma-secretase at residues 40-42 to produce beta-amyloid 40 and 42 peptides. Beta-amyloid aggregation and neuritic plaque formation are pathologic hallmarks of Alzheimer disease. This peptide corresponds to the human beta-amyloid 1-40 peptide.
ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱,。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。此項技術(shù)自70年代初問世以來,,發(fā)展十分迅速,,目前已被廣泛用于生物學和醫(yī)學科學的許多領(lǐng)域。
(一)原理
ELISA是以免疫學反應(yīng)為基礎(chǔ),,將抗原,、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。由于抗原,、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行,,每加入一種試劑孵育后,可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物,,從而保證試驗結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性,。在實際應(yīng)用中,通過不同的設(shè)計,,具體的方法步驟可有多種,。即:用于檢測抗體的間接法(圖a)、用于檢測抗原的雙抗體夾心法(圖b)以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等,。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法,。
(二)操作步驟
方法一 用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:
1. 包被:用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,,4℃過夜,。次日,棄去孔內(nèi)溶液,,用洗滌緩沖液洗3次,,每次3分鐘。(簡稱洗滌,,下同),。
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,。然后洗滌,。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔),。
3. 加酶標抗體:于各反應(yīng)孔中,,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時,洗滌,。
4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,,37℃10~30分鐘。
5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml,。
6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,,陰性反應(yīng)為無色或極淺,,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”,、“-”號表示,。也可測O?D值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,,則410nm)處,,以空白對照孔調(diào)零后測各孔O?D值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,,即為陽性,。
方法二 用于檢測未知抗體的間接法:
1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,,每孔加0.1ml,,4℃過夜。
2,、次日洗滌3次,。加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。同時做空白,、陰性及陽性孔對照于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml,,37℃孵育30-60分鐘,,洗滌,zui后一遍用DDW(超純水)洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4,、5,、6。
3. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,,37℃10~30分鐘,。
4. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
5. 結(jié)果判定:可于白色背景上,,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,,陽性程度越強,陰性反應(yīng)為無色或極淺,,依據(jù)所呈顏色的深淺,,以“+”,、“-”號表示。也可測O?D值:在ELISA檢測儀上,,于450nm(若以ABTS顯色,,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔O?D值,,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,,即為陽性。