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產(chǎn)品名稱:人乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白
英文名稱:Human Lactoferrin,LTF/LF ELISA KIT
產(chǎn)品規(guī)格:96人份/48人份
各種種屬:人,、大小鼠、豚鼠,、兔子,、豬、犬,、牛,、羊…
標本齊全:血清、血漿,、細胞培養(yǎng)上清液,、組織勻漿、組織液,、關(guān)節(jié)液,、胸腔溢液等…
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:2-8℃。
2.有效期:6個月
運輸條件低溫運輸,,用干冰或者冰袋低溫運輸,。
乳鐵蛋白(LF),又稱lactotransferrin(LTF),, 為運鐵蛋白中的一種多功能糖蛋白,。乳鐵蛋白是一種球狀 糖蛋白 ,其分子量為80 kDa,,廣泛存在于各種分泌液中,, 如牛奶、唾液,、眼淚,、和 鼻涕。乳鐵蛋白也存在于中期的嗜中性粒細胞中,,并由一些腺泡細胞分泌,。乳鐵蛋白可以從牛奶中提取或利用重組DNA技術(shù)獲得,。人的初乳的乳鐵蛋白濃度zui高,其次是人類的乳汁,,牛奶中濃度zui低(150毫克/升)[1] ,。
乳鐵蛋白是人體免疫系統(tǒng)的組分之一;,它具有抗菌活性(抗細菌劑,,抗真菌劑),,是先天防御的一部分,主要存在于粘膜中,。[1]乳鐵蛋白保護嬰兒使其免受細菌等病原侵害,。 [2][3]乳鐵蛋白還相互DNA和RNA、 多糖和肝素之間相互作用 ,,并在這些這些受體-配體復合物中表現(xiàn)出一定的生理功能。
ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱,。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù),。此項技術(shù)自70年代初問世以來,發(fā)展十分迅速,,目前已被廣泛用于生物學和醫(yī)學科學的許多領(lǐng)域,。
(一)原理
ELISA是以免疫學反應為基礎,將抗原,、抗體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù),。由于抗原、抗體的反應在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行,,每加入一種試劑孵育后,,可通過洗滌除去多余的游離反應物,從而保證試驗結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性,。在實際應用中,,通過不同的設計,具體的方法步驟可有多種,。即:用于檢測抗體的間接法(圖a),、用于檢測抗原的雙抗體夾心法(圖b)以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法,。
(二)操作步驟
方法一 用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:
1. 包被:用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml,。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4℃過夜,。次日,,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,,每次3分鐘,。(簡稱洗滌,,下同)。
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,,置37℃孵育1小時,。然后洗滌。(同時做空白孔,,陰性對照孔及陽性對照孔),。
3. 加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml,。37℃孵育0.5~1小時,,洗滌。
4. 加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,,37℃10~30分鐘,。
5. 終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應孔內(nèi)顏色越深,,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,,依據(jù)所呈顏色的深淺,,以“+”、“-”號表示,。也可測O?D值:在ELISA檢測儀上,,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,,以空白對照孔調(diào)零后測各孔O?D值,,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性,。
方法二 用于檢測未知抗體的間接法:
1,、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,,4℃過夜,。
2、次日洗滌3次,。加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌,。同時做空白、陰性及陽性孔對照于反應孔中,,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml,,37℃孵育30-60分鐘,洗滌,zui后一遍用DDW(超純水)洗滌,。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4,、5,、6。
3. 加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,,37℃10~30分鐘,。
4. 終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
5. 結(jié)果判定:可于白色背景上,,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應孔內(nèi)顏色越深,,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,,依據(jù)所呈顏色的深淺,,以“+”、“-”號表示,。也可測O?D值:在ELISA檢測儀上,,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,,以空白對照孔調(diào)零后測各孔O?D值,,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性,。