詳細(xì)介紹
【樣本要求】
1.樣本類(lèi)型和采集
血清:將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置0.5-2小時(shí)或4℃過(guò)夜,,然后1000×g離心20 分鐘,,取上清即可,或?qū)⑸锨逯糜趦H供科研使用,,不得用于臨床診斷,。-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
血漿:用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本,,并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測(cè),,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果),,稱(chēng)重后將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,,比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,,并做好記錄,。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨,。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,,可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復(fù)凍融,。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,,取上清即可檢測(cè),或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。細(xì)胞裂解液: 吸棄培養(yǎng)液,用 PBS(0.01 M,,pH 7.4)將細(xì)胞洗一遍,。用細(xì)胞刮刮下細(xì)胞(不能用胰酶和 EDTA 處理),加入 2-5mL PBS(0.01 M,,pH 7.4),。懸浮細(xì)胞可省略。收集細(xì)胞懸液,,4℃1000×g 離心 10min,,棄去培養(yǎng)基,用預(yù)冷的 PBS 潤(rùn)洗 3 次,。加入適量的預(yù)冷 PBS 或非變性細(xì)胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)重懸細(xì)胞,通常 6 孔板一個(gè)孔的細(xì)胞量需要 150-250μL PBS 重懸,。 將樣品放入-20℃或-80℃,使樣品冷凍,,再放室溫解凍樣品,,反復(fù)凍融 3 次,使細(xì)胞充分裂解,也可將樣品進(jìn)行超聲破碎,,以達(dá)到裂解的目的,。4℃ 10000×g 離心 10min,除去細(xì)胞碎片,,取上清即可檢測(cè),,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:請(qǐng)1000×g離心20分鐘,,取上清即可檢測(cè),,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。.樣本保存和穩(wěn)定性樣本在 2-8℃條件下,,可以?xún)?chǔ)存 72h,在- 20℃或-80℃可以?xún)?chǔ)存6 個(gè)月及以上,。樣本收集后,,不是一次檢測(cè)完,,請(qǐng)按一次用量分裝凍存,,避免反復(fù)凍融