植物過氧化氫酶（CAT）酶聯(lián)免疫試劑盒

使用目的：

本試劑盒用于測定植物組織，細胞及其它相關(guān)樣本中過氧化氫酶（CAT）活性,。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中植物過氧化氫酶（CAT）水平,。用純化的植物過氧化氫酶（CAT）抗體包被微孔板，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入過氧化氫酶（CAT）,，再與 HRP 標記的過氧化氫酶（CAT）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色,。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的植物過氧化氫酶（CAT）呈正相關(guān),。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中植物過氧化氫酶（CAT）活性濃度,。

操作步驟

1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

 2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）,、標準孔、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，然后再加待測樣品 10µl（樣品終稀釋度為 5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。 

3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30分鐘,。

4. 配液：將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30倍稀釋后備用 

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置 30秒后棄去,，如此重復 5次,，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50µl,，空白孔除外,。

7. 溫育：操作同 3。

8. 洗滌：操作同 5,。 

9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl,，再加入顯色劑 B50µl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色 15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液 50µl,，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。

11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。測定應在加終止液后 15分鐘以內(nèi)進行,。 

操作程序總結(jié)：  

 計算

 以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的 OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標準物的濃度與 OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的 OD值代入方程式，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),， 即為樣品的實際濃度。

 注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未 用完,，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果。

3．各步加樣均應使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差。一次加樣時間 控制在 5分鐘內(nèi),，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同時做標準曲線,，做復孔,。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本 OD值 大于標準品孔*孔的 OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計 算時請后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。 

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。

6．底物請避光保存,。 

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。 

9．本試劑不同批號組分不得混用,。

10. 如與英文說明書有異,，以英文說明書為準,。

 保存條件及有效期 

1．試劑盒保存：；2-8℃,。 

2．有效期：6個月