詳細介紹
植物過氧化氫酶(CAT)酶聯(lián)免疫試劑盒
使用目的:
本試劑盒用于測定植物組織,細胞及其它相關(guān)樣本中過氧化氫酶(CAT)活性,。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中植物過氧化氫酶(CAT)水平,。用純化的植物過氧化氫酶(CAT)抗體包被微孔板,制成固相抗體,,往包被單抗的微孔中依次加入過氧化氫酶(CAT),,再與 HRP 標記的過氧化氫酶(CAT)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色,。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的植物過氧化氫酶(CAT)呈正相關(guān),。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中植物過氧化氫酶(CAT)活性濃度,。
操作步驟
1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
8U/mL | 5 號標準品 | 150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液 |
|
|
|
4U/mL | 4 號標準品 | 150µl 的 5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液 |
|
|
|
2U/mL | 3 號標準品 | 150µl 的 4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液 |
|
|
|
1U/mL | 2 號標準品 | 150µl 的 3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液 |
|
|
|
0.5U/mL | 1 號標準品 | 150µl 的 2 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液 |
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,,其余各步操作相同),、標準孔、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl,,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,然后再加待測樣品 10µl(樣品終稀釋度為 5倍),。加樣將樣品加于酶標板孔底部,,盡 量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,。
3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30分鐘,。
4. 配液:將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,,甩干,,每孔加滿洗滌液,靜置 30秒后棄去,,如此重復 5次,,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑 50µl,,空白孔除外,。
7. 溫育:操作同 3。
8. 洗滌:操作同 5,。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,,再加入顯色劑 B50µl,,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色 15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液 50µl,,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色),。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值),。測定應在加終止液后 15分鐘以內(nèi)進行,。
操作程序總結(jié):
計算
以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,,在坐標紙上繪出標準曲線,,根據(jù)樣品的 OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù),;或用標準物的濃度與 OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,,將樣品的 OD值代入方程式,計算出樣品濃度,,再乘以稀釋倍數(shù),, 即為樣品的實際濃度。
注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,,酶標包被板開封后如未 用完,,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,,稀釋時可在水浴中加溫助溶,,洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應使用加樣器,,并經(jīng)常校對其準確性,,以避免試驗誤差。一次加樣時間 控制在 5分鐘內(nèi),,如標本數(shù)量多,,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,,做復孔,。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本 OD值 大于標準品孔*孔的 OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,,計 算時請后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5),。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染,。
6.底物請避光保存,。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8.所有樣品,,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。
9.本試劑不同批號組分不得混用,。
10. 如與英文說明書有異,,以英文說明書為準,。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃,。
2.有效期:6個月