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大分子抗原因其具有兩個以上的抗原決定簇,，而可用雙抗體夾心法測定，小分子半抗原如di高辛,、茶堿等藥物以及T3,，T4及睪酮等激素因其只有一個抗原決定簇，從而無法使用雙抗夾心方法測定,，只能采用競爭抑制法測定,。具體步驟如下：

 

1．先用抗小分子的特異抗體如雙抗體夾心法一樣包被固相并封閉。

 

2．同時加入待測樣本和酶標(biāo)的小分子,，溫育一定時間后洗板,；此步中，待測樣本的小分子將與酶標(biāo)小分子競爭與固相上特異抗體結(jié)合,。

 

3．加入酶底物,，溫育顯色測定，顯色的強(qiáng)弱與待測樣本中的小分子含量成反比,。

 

這種測定模式中,，需要得到小分子與酶的結(jié)合物，而小分子酶結(jié)合物一則在制備上不如抗體酶結(jié)合物簡便,，二則其純化亦頗為困難,，結(jié)合有小分子的酶與游離酶之間難于分離。因此,，有人嘗試在合成二或多聚體小分子的基礎(chǔ)上,，建立雙抗夾心競爭ELISA方法測定小分子,，測定的靈敏度和特異性均有所提高.

 

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