Tβ4,小鼠胸腺素β4酶聯(lián)免疫試劑盒說明書

l 本試劑盒用于體外定量檢測血清,、血漿,、組織、細胞上清及相關液體樣本中小鼠胸腺素β4（Tβ4）的含量,。

l 有效期：6個月

l 保存條件：2-8℃

l 本試劑盒僅供體外研究使用,，不用于臨床診斷

實驗原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被小鼠胸腺素β4（Tβ4）捕獲抗體的包被微孔中,，依次加入標本,、標準品、HRP標記的檢測抗體,，經(jīng)過溫育并*洗滌,。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的小鼠胸腺素β4（Tβ4）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值）,，計算樣品濃度,。

Tβ4,小鼠胸腺素β4酶聯(lián)免疫試劑盒說明書的類型
ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體,。在這種測定方法中有三個必要的試劑：（1）固相的抗菌素原或抗體,，即"免疫吸附劑"（immunosorbent）；（2）酶標記的抗原或抗體,，稱為"結合物"（conjugate）,；（3）酶反應的底物。根據(jù)試劑的來源和標本的情況以及檢測的具體條件,，可設計出各種不同類型的檢測方法,。

雙抗體夾心法是檢測抗原zui常用的方法，操作步驟如下：
1） 將特異性抗體與固相載體聯(lián)結,，形成固相抗體,。洗滌除去未結合的抗體及雜質。
2） 加受檢標本,，保溫反應,。標本中的抗原與固相抗體結合，形成固相抗原抗體復合物,。洗滌除去其他未結合物質,。
3） 加酶標抗體，保溫反應,。固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合,。*洗滌未結合的酶標抗體,。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢抗原的量相關。
4） 加底物顯色,。固相上的酶催化底物成為有色產(chǎn)物,。通過比色，測知標本中抗原的量,。在臨床檢驗中,，此法適用于檢驗各種蛋白質等大分子抗原，例如HBsAg,、HBeAg,、AFP、hCG等,。只要獲得針對受檢抗原的異性抗體,，就可用于包被固相載體和制備酶結合物而建立此法。如抗體的來源為抗血清,，包被和酶標用的抗體分別取自不同種屬的動物,。如應用單克隆抗體，一般選擇兩個針對抗原上不同決定簇的單抗,，分別用于包被固相載體和制備酶結合物,。這種雙位點夾心法具有很高的特異性，而且可以將受檢標本和酶標抗體一起保溫反應,，作一步檢測,。
在一步法測定中，當標本中受檢抗原的含量很高時,，過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合,，而不再形成"夾心復合物"。類同于沉淀反應中抗原過剩的后帶現(xiàn)象,，此時反應后顯色的吸光值（位于抗原過剩帶上）與標準曲線（位于抗體過剩帶上）某一抗原濃度的吸光值相同（參見1.3.2,，圖1-4），如按常法測讀,，所得結果將低于實際的含量,，這種現(xiàn)象被稱為鉤狀效應（hook effect），因為標準曲線到達高峰后呈鉤狀彎落,。鉤狀效應嚴重時，反應甚至可不顯色而出現(xiàn)假陰性結果,。因此在使用一步法試劑測定標本中含量可異常增高的物質（例如血清中HBsAg,、AFP和尿液hCG等）時，應注意可測范圍的zui高值,。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應,。
假使在被測分子的不同位點上含有多個相同的決定簇,，例如HBsAg的a決定簇，也可用針對此決定的同一單抗分別包被固相和制備酶結合物,。但在HBsAg的檢測中應注意亞型問題,，HBsAg有adr、adw,、ayr,、ayw4個亞型，雖然每種亞型均有相同的a決定簇的反應性,，這也是用單抗作夾心法應注意的問題,。
雙抗體夾心法測抗原的另一注意點是類風濕因子（RF）的干擾。RF是一種自身抗體,，多為IgM型,，能和多種動物IgG的Fc段結合。用作雙抗體夾心法檢測的血清標本中如含有RF,，它可充當抗原成份,，同時與固相抗體和酶標抗體結合，表現(xiàn)出假陽性反應,。采用F（ab'）或Fab片段作酶結合物的試劑,，由于去除了Fc段，從而消除RF的干擾,。雙抗體夾心法ELISA試劑是否受RF的影響,，已被列為這類試劑的一項考核指標。
雙抗體夾心法適用于測定二價或二價以上的大分子抗原,，但不適用于測定半抗原及小分子單價抗原,，因其不能形成兩位點夾心。

Tβ4,小鼠胸腺素β4酶聯(lián)免疫試劑盒說明書樣品要求

·客戶需提供待檢測抗體和包被用抗原,。

·檢測的樣本為細胞培養(yǎng)上清,、人和動物的血清、血漿,。

·樣本收集后應立即-20℃保存,，若長期保存應-70℃。

·樣本量的要求：若一個指標做復孔檢測應不少于250ul,，做單孔檢測應不少于120ul,。建 議若客戶樣本量充足提供500ul以上。

·客戶的樣本收集后,，立即按要求保存,，切忌反復凍融。外地客戶郵寄需要用干冰運輸,。郵寄前請與溝通確認,。