小鼠糖原磷酸化酶（PYGL）酶聯(lián)免疫試劑盒用于體外定量檢測血清,、血漿,、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中小鼠糖原磷酸化酶（PYGL）的含量,。

小鼠糖原磷酸化酶（PYGL）酶聯(lián)免疫試劑盒

l 本試劑盒用于體外定量檢測血清,、血漿、組織,、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中小鼠糖原磷酸化酶（PYGL）的含量,。

l 有效期：6個月

l 保存條件：2-8℃

l 本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷

 

實(shí)驗(yàn)原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）,。往預(yù)先包被小鼠糖原磷酸化酶（PYGL）捕獲抗體的包被微孔中,，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品,、HRP標(biāo)記的檢測抗體,，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠糖原磷酸化酶（PYGL）呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值）,，計算樣品濃度。

小鼠糖原磷酸化酶（PYGL）酶聯(lián)免疫試劑盒實(shí)驗(yàn)材料與試劑配制

1.儀器與材料：酶標(biāo)儀（使用前預(yù)熱30分鐘）,，微量加液器,、吸頭、蒸餾水或去離子水,，濾紙,。

2. 洗液的配制：按1:30的比例配制洗液備用。

樣品收集,、處理及保存

1）.細(xì)胞培養(yǎng)上清：

適用于檢測體外培養(yǎng)的細(xì)胞分泌性成份,。用無菌管收集細(xì)胞上清液,，以1000×g離心15分鐘，收集上清,。

2）細(xì)胞：

用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞3次,，調(diào)整細(xì)胞濃度達(dá)到104-106/ml 左右，通過反復(fù)凍融,，使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,，或者細(xì)胞超聲粉碎，離心取上清液檢測,。

3）血清：

在室溫下,，血液自然凝固，以1000×g離心15分鐘,，取上清待測,。

4）血漿：

應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合后靜置10-20 分鐘后,，以1000×g離心15分鐘,，收集上清。

5）體液：

包括胸腹水,、腦脊液,，分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集,，以1000×g離心15分鐘,，收集上清。

6.）組織標(biāo)本：

切取組織標(biāo)本,，稱取重量0.5mg,，加入500ul 的PBS，用手工或勻漿器,，或超聲破碎儀將標(biāo)本勻漿,，以2000-3000 rmp離心20 分鐘，收集上清進(jìn)行檢測,。

樣品中不能含有NaN3,，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

7）保存：

如果樣品不能立即檢測,，應(yīng)將其分裝,，-70 ℃保存,，避免反復(fù)冷凍,。保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心,。血液標(biāo)本盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中含大量顆粒,，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

操作步驟

1）取出試劑盒，室溫（20-25℃）放置30分鐘,。

2）分組：取出96孔板,，根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)，把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理,。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品組（6個濃度）,、空白孔、待測樣品組,。

3）標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：準(zhǔn)備小試管6 只,，依次編好號碼，先在各小試管中加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100ul,，然后取原濃度標(biāo)準(zhǔn)品100ul加入一只已編好號的試管中,，充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第二支試管中，充分混勻,；再在該試管中取100ul加入第三只試管中,，充分混勻；再在該試管中取100ul 加入第四只試管中,，充分混勻,；再在該試管中取100ul加入第五只試管中,，充分混勻,；然后在該試管中取100ul，棄掉,。第六只試管作為0 號標(biāo)準(zhǔn)品,。

注：為減少實(shí)驗(yàn)誤差，保證準(zhǔn)確性,，建議設(shè)置復(fù)孔,。

4）加樣：依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入50ul的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中；空白對照孔加入50ul的蒸餾水,；其余微孔中先加樣品40ul然后再加生物素標(biāo)記的抗體10ul,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,。

5）溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

6）洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒棄去,，如此重復(fù)5 次，拍干,。

7）加酶標(biāo)溶液：標(biāo)準(zhǔn)品組,、待測樣本組各孔中加入50ul的酶標(biāo)溶液（空白對照孔除外）,。

8）溫育：酶標(biāo)板用封板紙密封后,，放入濕盒內(nèi)于37℃恒溫孵育1小時。

9）洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔,，靜置15-30s,，充分清洗酶標(biāo)板5次，用吸水紙*拍干,。

10）顯色：各孔加入顯色劑A液50ul后,，再加入顯色劑B液50ul,。

11）終止：25-37℃下避光反應(yīng)10-15分鐘，加入50ul終止液,。

12）讀板：在450nm波長讀取各孔的OD值,。

注：讀板時必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡,，讀板時間控制在終止反應(yīng)后的30分鐘內(nèi),，以免影響準(zhǔn)確性。

數(shù)據(jù)計算

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),，OD值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度,，即為樣品的實(shí)際濃度,。

注意事項(xiàng)

1）實(shí)驗(yàn)操作中必須使用一次性吸頭，避免交叉污染,。

2）加樣：加樣時,，要控制加樣速度，避免*孔與zui后一孔間的時間間隔過大，否則將會導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時間,，從而影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性,。

3）孵育：嚴(yán)格按照說明書上規(guī)定的孵育時間和溫度進(jìn)行,。

反應(yīng)時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化，如果顏色較深,，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng),。

4）建議實(shí)驗(yàn)前預(yù)測樣品含量，如樣品濃度過高,，應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋,，計算結(jié)果時乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

5）建議使用本試劑盒時先做預(yù)實(shí)驗(yàn)（即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，試用幾個標(biāo)本）,，如果對本試劑盒有任何疑問，可和所購經(jīng)銷商,，如果因運(yùn)輸過程導(dǎo)致試劑盒失效,，可要求調(diào)換，但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失,。

保存條件及有效期

1.試劑盒保存：2-8℃

2.有效期：6個月

訂貨說明

1）賣方確保所訂產(chǎn)品與目錄技術(shù)指標(biāo)保持*,；

2）為了確保買方產(chǎn)品在運(yùn)輸中的質(zhì)量，對有特殊要求的低溫產(chǎn)品予以濕冰運(yùn)輸,。

3）收到貨物后如出現(xiàn)質(zhì)量問題,，買方需在收到貨物一個月內(nèi)向賣方提出書面異議。買方逾期不提出異議,，視為貨物符合其要求,，賣方不付任何責(zé)任。

4）出現(xiàn)質(zhì)量以外的問題,，如破損等,，買方應(yīng)在收貨后一個周內(nèi)提出。買方未按時提出異議,，視為該產(chǎn)品合格,。

本公司對所有售出的產(chǎn)品保證質(zhì)量，并提供良好的售后服務(wù),，有關(guān)產(chǎn)品質(zhì)量的投訴,，請?jiān)谑盏截浳锏?2天內(nèi)以書面形式提出，并向我公司技術(shù)人員提供相應(yīng)的材料,，我們會及時派人解決,。所有形式的賠償或退換僅限于產(chǎn)品本身，不涉及其他間接內(nèi)容。凡購買本公司任意款elisa試劑盒,，均可享受免費(fèi)代測服務(wù),，并提供技術(shù)指導(dǎo)。