BNP,小鼠腦鈉素;腦鈉尿肽酶聯(lián)免疫試劑盒

l 本試劑盒用于體外定量檢測血清,、血漿,、組織、細胞上清及相關(guān)液體樣本中小鼠腦鈉素;腦鈉尿肽（BNP）的含量,。

l 有效期：6個月

l 保存條件：2-8℃

l 本試劑盒僅供體外研究使用,，不用于臨床診斷

實驗原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被小鼠腦鈉素;腦鈉尿肽（BNP）捕獲抗體的包被微孔中,，依次加入標本,、標準品、HRP標記的檢測抗體,，經(jīng)過溫育并*洗滌,。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的小鼠腦鈉素;腦鈉尿肽（BNP）呈正相關(guān),。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度,。

BNP,小鼠腦鈉素;腦鈉尿肽酶聯(lián)免疫試劑盒樣品采集：

收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定,。對收集后當天進行檢測的標本，儲存在4℃?zhèn)溆?，如有特殊原因需要周期收集標本,，將標本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復凍融,。標本2-8℃可保存48小時,，-20℃可保存1個月。-70度可保存6個月,。部分激素類標本需添加抑肽酶,。

操作步驟

ELISA試驗時，注意事項如下：

1.正式試驗時,，應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,，待檢樣品應作一式二份，以保證實驗結(jié)果的準確性,。有時本底較高,，說明有非特異性反應，可采用羊血清,、兔血清或BSA等封閉,。

2.在ELISA中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的,，其中包括:

(1)固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體,，如聚氯乙烯、聚苯乙烯,、聚丙酰胺和纖維素等,。其形式可以是凹孔平板、試管,、珠粒等,。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被,，在同一實驗條件下進行反應，觀察其顯色反應是否均一性,，據(jù)此判明其吸附性能是否良好,。

(2)包被抗體(或抗原)的選擇：將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度,，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時,。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg／ml等)進行包被后,，在其它試驗條件相同時,，觀察陽性標本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度,。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg／ml,。

(3)酶標記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物,、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度,。

(4)酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉、安全,、有明顯地顯色反應,，而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,，應注意防護,。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體,，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,，應加入強酸或強堿以終止反應,。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜,。底物使用液必須新鮮配制,，尤其是H2O2在臨用前加入。