MC Ab,小鼠黑色素細胞抗體酶聯(lián)免疫試劑盒用于體外定量檢測血清,、血漿、組織,、細胞上清及相關(guān)液體樣本中小鼠黑色素細胞抗體（MC Ab）的含量,。

MC Ab,小鼠黑色素細胞抗體酶聯(lián)免疫試劑盒

l 本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿,、組織,、細胞上清及相關(guān)液體樣本中小鼠黑色素細胞抗體（MC Ab）的含量。

l 有效期：6個月

l 保存條件：2-8℃

l 本試劑盒僅供體外研究使用,，不用于臨床診斷

 

實驗原理

試劑盒采用間接法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）,。往預(yù)先包被小鼠黑色素細胞抗體（MC Ab）捕獲抗原的包被微孔中，依次加入標本,、標準品,、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌,。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的小鼠黑色素細胞抗體（MC Ab）呈正相關(guān),。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度,。

MC Ab,小鼠黑色素細胞抗體酶聯(lián)免疫試劑盒實驗材料與試劑配制

1.儀器與材料：酶標儀（使用前預(yù)熱30分鐘）,，微量加液器、吸頭,、蒸餾水或去離子水,，濾紙。

2. 洗液的配制：按1:30的比例配制洗液備用,。

樣品收集,、處理及保存

1）.細胞培養(yǎng)上清：

適用于檢測體外培養(yǎng)的細胞分泌性成份。用無菌管收集細胞上清液,，以1000×g離心15分鐘,，收集上清。

2）細胞：

用PBS反復洗滌細胞3次,，調(diào)整細胞濃度達到104-106/ml 左右,，通過反復凍融，使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份,，或者細胞超聲粉碎,，離心取上清液檢測。

3）血清：

在室溫下,，血液自然凝固,，以1000×g離心15分鐘，取上清待測,。

4）血漿：

應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,，混合后靜置10-20 分鐘后，以1000×g離心15分鐘,，收集上清,。

5）體液：

包括胸腹水、腦脊液,，分泌物等,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集，以1000×g離心15分鐘,，收集上清,。

6.）組織標本：

切取組織標本，稱取重量0.5mg,，加入500ul 的PBS,，用手工或勻漿器，或超聲破碎儀將標本勻漿,，以2000-3000 rmp離心20 分鐘,，收集上清進行檢測。

樣品中不能含有NaN3,，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

7）保存：

如果樣品不能立即檢測，應(yīng)將其分裝,，-70 ℃保存,，避免反復冷凍。保存過程中如出現(xiàn)沉淀,，應(yīng)再次離心,。血液標本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒,，檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

操作步驟

1）取出試劑盒,，室溫（20-25℃）放置30分鐘。

2）分組：取出96孔板,，根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),，把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標準品組（6個濃度）,、空白孔,、待測樣品組,。

3）標準品的稀釋：準備小試管6 只，依次編好號碼,，先在各小試管中加入標準品稀釋液100ul,，然后取原濃度標準品100ul加入一只已編好號的試管中，充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第二支試管中,，充分混勻,；再在該試管中取100ul加入第三只試管中，充分混勻,；再在該試管中取100ul 加入第四只試管中,，充分混勻；再在該試管中取100ul加入第五只試管中,，充分混勻,；然后在該試管中取100ul，棄掉,。第六只試管作為0 號標準品,。

注：為減少實驗誤差，保證準確性,，建議設(shè)置復孔,。

4）加樣：依照標準品的順序分別加入50ul的標準品溶液于空白微孔中；空白對照孔加入50ul的蒸餾水,；其余微孔中先加樣品40ul然后再加生物素標記的抗體10ul,。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,。

5）溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

6）洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30 秒棄去,，如此重復5 次，拍干,。

7）加酶標溶液：標準品組,、待測樣本組各孔中加入50ul的酶標溶液（空白對照孔除外）。

8）溫育：酶標板用封板紙密封后,，放入濕盒內(nèi)于37℃恒溫孵育1小時,。

9）洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔，靜置15-30s,，充分清洗酶標板5次,，用吸水紙*拍干,。

10）顯色：各孔加入顯色劑A液50ul后，再加入顯色劑B液50ul,。

11）終止：25-37℃下避光反應(yīng)10-15分鐘,，加入50ul終止液。

12）讀板：在450nm波長讀取各孔的OD值,。

注：讀板時必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡,，讀板時間控制在終止反應(yīng)后的30分鐘內(nèi),，以免影響準確性,。

數(shù)據(jù)計算

以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式,，計算出樣品濃度，即為樣品的實際濃度,。

注意事項

1）實驗操作中必須使用一次性吸頭,，避免交叉污染。

2）加樣：加樣時,，要控制加樣速度,，避免*孔與zui后一孔間的時間間隔過大，否則將會導致不同的預(yù)孵育時間,，從而影響實驗的準確性以及重復性,。

3）孵育：嚴格按照說明書上規(guī)定的孵育時間和溫度進行。

反應(yīng)時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化,，如果顏色較深,，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。

4）建議實驗前預(yù)測樣品含量,，如樣品濃度過高,，應(yīng)對樣品進行稀釋，計算結(jié)果時乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù),。

5）建議使用本試劑盒時先做預(yù)實驗（即先做標準曲線,，試用幾個標本），如果對本試劑盒有任何疑問,，可和所購經(jīng)銷商,，如果因運輸過程導致試劑盒失效，可要求調(diào)換,，但概不承擔產(chǎn)品本身以外的任何損失,。

保存條件及有效期

1.試劑盒保存：2-8℃

2.有效期：6個月

訂貨說明

1）賣方確保所訂產(chǎn)品與目錄技術(shù)指標保持*,；

2）為了確保買方產(chǎn)品在運輸中的質(zhì)量，對有特殊要求的低溫產(chǎn)品予以濕冰運輸,。

3）收到貨物后如出現(xiàn)質(zhì)量問題,，買方需在收到貨物一個月內(nèi)向賣方提出書面異議。買方逾期不提出異議,，視為貨物符合其要求,，賣方不付任何責任。

4）出現(xiàn)質(zhì)量以外的問題,，如破損等,，買方應(yīng)在收貨后一個周內(nèi)提出。買方未按時提出異議,，視為該產(chǎn)品合格,。

本公司對所有售出的產(chǎn)品保證質(zhì)量，并提供良好的售后服務(wù),，有關(guān)產(chǎn)品質(zhì)量的投訴,，請在收到貨物的32天內(nèi)以書面形式提出，并向我公司技術(shù)人員提供相應(yīng)的材料,，我們會及時派人解決,。所有形式的賠償或退換僅限于產(chǎn)品本身，不涉及其他間接內(nèi)容,。凡購買本公司任意款elisa試劑盒,，均可享受免費代測服務(wù)，并提供技術(shù)指導,。