PDHE1,小鼠丙酮酸脫氫酶E1酶聯(lián)免疫試劑盒

l 本試劑盒用于體外定量檢測血清,、血漿、組織,、細胞上清及相關液體樣本中小鼠丙酮酸脫氫酶E1（PDHE1）的含量,。

l 有效期：6個月

l 保存條件：2-8℃

l 本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷

實驗原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）,。往預先包被小鼠丙酮酸脫氫酶E1（PDHE1）捕獲抗體的包被微孔中,，依次加入標本、標準品,、HRP標記的檢測抗體,，經(jīng)過溫育并*洗滌,。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的小鼠丙酮酸脫氫酶E1（PDHE1）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值）,，計算樣品濃度,。

PDHE1,小鼠丙酮酸脫氫酶E1酶聯(lián)免疫試劑盒性能

1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性,。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990,。

2. 特異性：不與其它細胞因子反應。處

3. 重復性：板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于10%,。

操作步驟

實驗開始前，請?zhí)崆芭渲煤盟性噭?，試劑或樣品稀釋時,，均需混勻，混勻時盡量避免起泡,。每次檢測都應該做標準曲線,。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋,，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍,。

用于檢測未知抗體的間接法：

用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml，每孔加0.1ml,，4℃過夜,。次日洗滌3次。

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加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌,。（同時做空白,、陰性及陽性孔對照）

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于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體（抗抗體）0.1ml,， 　　37℃孵育30-60分鐘,，洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。

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加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,，37℃ 10～30分鐘,。

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終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。

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結(jié)果判定：可于白色背景上,，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應孔內(nèi)顏色越深,，陽性程度越強,，陰性反應為無色或極淺,，依據(jù)所呈顏色的深淺,，以“+”、“-”號表示,。也可測OD值：在ELISA檢測儀上,，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處,，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性,。

組成

48孔配置 96孔配置 保存

說明書 1份 1份

封板膜 2片(48) 2片(96)

密封袋 1個 1個

酶標包被板 1×48 1×96 2-8℃保存

標準品：13.5U/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存

標準品稀釋液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 2-8℃保存

酶標試劑 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存

樣品稀釋液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存

顯色劑A液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存

顯色劑B液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存

終止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存

20倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 30ml×1瓶 2-8℃保存

樣品收集,、處理

1、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。

2,、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測,。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3,、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。