小鼠丙酮酸脫氫酶（PDH）酶聯(lián)免疫試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織,、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中小鼠丙酮酸脫氫酶（PDH）的含量,。

小鼠丙酮酸脫氫酶（PDH）酶聯(lián)免疫試劑盒

l 本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿,、組織,、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中小鼠丙酮酸脫氫酶（PDH）的含量。

l 有效期：6個月

l 保存條件：2-8℃

l 本試劑盒僅供體外研究使用,，不用于臨床診斷

 

實驗原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）,。往預(yù)先包被小鼠丙酮酸脫氫酶（PDH）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本,、標(biāo)準(zhǔn)品,、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌,。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的小鼠丙酮酸脫氫酶（PDH）呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度,。

小鼠丙酮酸脫氫酶（PDH）酶聯(lián)免疫試劑盒貯存方式

 貯存于2℃-8℃.如有需要,，我們將竭城為顧客提供售前，售中,，售后的*服務(wù)!

保存------如果樣品不立即使用,，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍.

標(biāo)本的稀釋原則

首先通過文獻(xiàn)檢索的方式了解待測樣本的大致含量，確定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù),。只有稀釋至標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍內(nèi),，檢測的結(jié)果才是準(zhǔn)確的。稀釋的過程中,，應(yīng)做好詳細(xì)的記錄,。zui后計算濃度時，稀釋了“N”倍,，標(biāo)本的濃度應(yīng)再乘以“N”,。

標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則：2瓶,，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上,，然后反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,，其濃度為300 pg/ml，做系列倍比稀釋后,，分別稀釋300 pg/ml,，150 pg/ml,，75 pg/ml,，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml,，9 pg/ml,，4.5 pg/ml，樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0 pg/ml,，臨用前15分鐘內(nèi)配制,。

如配制150 pg/ml標(biāo)準(zhǔn)品：取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可,，其余濃度以此類推,。

生物素標(biāo)記抗體的稀釋原則：

臨用前以生物素標(biāo)記抗體稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),，實際配制時應(yīng)多配制0.1-0.2ml,。如10μl生物素標(biāo)記抗體加990μl生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻,，在使用前一小時內(nèi)配制,。

辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素的稀釋原則：

臨用前以辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),，實際配制時應(yīng)多配制0.1-0.2ml,。如10μl辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素加990μl辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 的比例配制，輕輕混勻,，在使用前一小時內(nèi)配制,。

具體操作方法

測定抗原的，主要有四種方法,。 

1,、競爭法（Competition method）:方法的基本原理可見圖1：本法首先將特異性抗體吸附于固相載體表面，我們把抗原和抗體吸附到固相載體表面的這個過程,，稱為包被（Coated）,，也可叫做致敏。經(jīng)洗滌后分成兩組：一組加酶標(biāo)記抗原和被測抗原的混合液,，而另一組只加酶標(biāo)記抗原,，再經(jīng)孵育洗滌后加底物顯色,，這兩組底物降解量之差，即為我們所要測定的未知抗原的量,。 

這種方法所測定的抗原只要有一個結(jié)合部位即可,，因此，對小分子抗原如激素和藥物之類的測定常用此法,。該法的優(yōu)點(diǎn)是快,，因為只有一個保溫洗滌過程。但需用較多量的酶標(biāo)記抗原為其缺點(diǎn),。 

定量測定

ELSIA操作步驟復(fù)雜,，影響反應(yīng)因素較多，特別是固相載體的包被難達(dá)到各個體之間的*,，因此在定量測定中,，每批測試均須用一系列不同濃度的參考標(biāo)準(zhǔn)品在相同的條件下制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。測定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA,，標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍一般較寬,，曲線zui高點(diǎn)的吸光度可接近2.0，繪制時常用半對數(shù)紙,，以檢測物的濃度為橫坐標(biāo),，以吸光度為縱坐標(biāo)，將各濃度的值逐點(diǎn)連接,，所得曲線一般呈S形,，其頭、尾部曲線趨于平坦,，中央較呈直線的部分是的檢測區(qū)域,。

定性測定

定性測定的結(jié)果判斷是對受檢標(biāo)本中是否含有待測抗原或抗體作出"有"或"無"的簡單回答，分別用"陽性",、"陰性"表示,。"陽性"表示該標(biāo)本在該測定系統(tǒng)中有反應(yīng)。"陰性"則為無反應(yīng),。用定性判斷法也可得到半定量結(jié)果,，即用滴度來表示反應(yīng)的強(qiáng)度，其實質(zhì)仍是一個定性試驗,。在這種半定量測定中,，將標(biāo)本作一系列稀釋后進(jìn)行試驗，呈陽性反應(yīng)的zui高稀釋度即為滴度,。根據(jù)滴度的高低,，可以判斷標(biāo)本反應(yīng)性的強(qiáng)弱，這比觀察不稀釋標(biāo)本呈色的深淺判斷為強(qiáng)陽性,、弱陽性更具定量意義,。

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