詳細介紹
人β氨基己糖苷酶(β-Hex)酶聯(lián)免疫試劑盒
l 本試劑盒用于體外定量檢測血清,、血漿、組織,、細胞上清及相關液體樣本中人β氨基己糖苷酶(β-Hex)的含量。
l 有效期:6個月
l 保存條件:2-8℃
l 本試劑盒僅供體外研究使用,不用于臨床診斷
實驗原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA),。往預先包被人β氨基己糖苷酶(β-Hex)捕獲抗體的包被微孔中,,依次加入標本、標準品,、HRP標記的檢測抗體,,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人β氨基己糖苷酶(β-Hex)呈正相關,。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),,計算樣品濃度。
人β氨基己糖苷酶(β-Hex)酶聯(lián)免疫試劑盒的類型
ELISA可用于測定抗原,,也可用于測定抗體,。在這種測定方法中有三個必要的試劑:(1)固相的抗菌素原或抗體,即"免疫吸附劑"(immunosorbent),;(2)酶標記的抗原或抗體,,稱為"結(jié)合物"(conjugate);(3)酶反應的底物,。根據(jù)試劑的來源和標本的情況以及檢測的具體條件,,可設計出各種不同類型的檢測方法。
當抗原材料中的干擾物質(zhì)不易除去,,或不易得到足夠的純化抗原時,,可用此法檢測特異性抗體。其原理為標本中的抗體和一定量的酶標抗體競爭與固相抗原結(jié)合,。標本中抗體量越多,,結(jié)合在固相上的酶標抗體愈少,因此陽性反應呈色淺于陰性反應,。如抗原為高純度的,,可直接包被固相。如抗原中會有干擾物質(zhì),,直接包被不易成功,,可采用捕獲包被法,即先包被與固相抗原相應的抗體,,然后加入抗原,,形成固相抗原。洗滌除去抗原中的
雜質(zhì),,然后再加標本和酶標抗體進行競爭結(jié)合反應,。競爭法測抗體有多種模式,可將標本和酶標抗體與固相抗原競爭結(jié)合,抗HBc ELISA一般采用此法,。另一種模式為將標本與抗原一起加入到固相抗體中進行競爭結(jié)合,,洗滌后再加入酶標抗體,與結(jié)合在固相上的抗原反應,??笻Be的檢測一般采用此法。
洗板方法
1. 手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內(nèi)的液體,;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,,酶標板朝下用力拍幾次;將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi),,浸泡1-2分鐘,,根據(jù)需要,重復此過程數(shù)次,。
2. 自動洗板:如果有自動洗板機,,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
人β氨基己糖苷酶(β-Hex)酶聯(lián)免疫試劑盒計算
以標準物的濃度為縱坐標(對數(shù)坐標),,OD值為橫坐標(對數(shù)坐標),,在對數(shù)坐標紙上繪出標準曲線。推薦使用專業(yè)制作曲線軟件進行分析,,如curve expert 1.3,,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度,再乘以稀釋倍數(shù),;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的回歸方程式,,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,,再乘以稀釋倍數(shù),,即為樣品的實際濃度。