人縮醛酶A（ALD-A）酶聯(lián)免疫試劑盒說明書

l 本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿,、組織,、細胞上清及相關液體樣本中人縮醛酶A（ALD-A）的含量。

l 有效期：6個月

l 保存條件：2-8℃

l 本試劑盒僅供體外研究使用,，不用于臨床診斷

實驗原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）,。往預先包被人縮醛酶A（ALD-A）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本,、標準品,、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌,。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的人縮醛酶A（ALD-A）呈正相關,。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度,。

人縮醛酶A（ALD-A）酶聯(lián)免疫試劑盒說明書產(chǎn)品規(guī)格

規(guī)格 可測樣數(shù) 標準孔 空白對照 產(chǎn)地 庫存

96T      85個樣    10       1         進口 現(xiàn)貨

48T      37個樣  10       1         進口 現(xiàn)貨

自備材料

1）蒸餾水,。

2）加樣器：5ul、10ul,、50ul,、100ul、200ul,、500ul,、1000ul。

3）振蕩器及磁力攪拌器等,。

安全性

1）避免直接接觸終止液和底物A,、B。一旦接觸到這些液體,，請盡快用水沖洗,。

2）實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品,。

3）不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份,。

操作注意事項

1）試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫,。稀稀過后的標準品應丟棄,，不可保存。

2）實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,，密封保存,，以免變質(zhì)。

3）不用的其它試劑應包裝好或蓋好,。不同批號的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用。

4）使用一次性的吸頭以免交叉污染,，吸取終止液和底物A,、B液時，避免使用帶金屬部分的加   樣器,。

5）使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

6）洗滌酶標板時應充分拍干,，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水,。

7）底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子,。底物B對光敏感,，避免長時間暴露于光下。避免用手   接觸,，有毒,。實驗完成后應立即讀取OD值。

8）加入試劑的順序應*,，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣,。

9）按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作,。

樣品收集,、處理及保存方法

1）血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,。收集血液后,，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2）血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。

3）細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。

4）組織勻漿-----將組織加入適量shengli鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液

5）保存------如果樣品不立即使用,，應將其分成小部分-70 ℃保存,，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒,，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

試劑的準備

1）標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備，不能儲存,。稀釋前將標準品振蕩混勻,。

2）洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

操作步驟

1）使用前,，將所有試劑充分混勻,。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡,，產(chǎn)生加樣上的誤差,。

2）根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔,。 每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,，能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內(nèi),。

3）加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔,、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi)。立即加入50ul的生物 素標記的抗體,。蓋上膜板,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時,。

4）甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒,，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干。重復此操作3   次,。如果用洗板機洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次。

5）每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育30分鐘,。

6）甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒,，甩去洗滌液，用吸水紙拍干,。重復此操作3次,。如果用洗板機洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次,。

7）每孔加入底物A、B各50ul,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育10分鐘。避免光照,。

8）取出酶標板,，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結(jié)果,。

9）在450nm波長處測定各孔的OD值,。

6號標準品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標準曲線無法得到精確的結(jié)果,。

1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品,。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990,。

2. 特異性：不與其它細胞因子反應,。

3. 重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%,。

結(jié)果判斷與分析

1,、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標（Y）,，相應的待測物質(zhì)標準品濃度為橫坐標（X）,，做得相應的曲線，樣品的待測物質(zhì)含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度,。