人前列腺酸性磷酸酶（PAP）酶聯(lián)免疫試劑盒

l 本試劑盒用于體外定量檢測血清,、血漿、組織,、細胞上清及相關液體樣本中人前列腺酸性磷酸酶（PAP）的含量,。

l 有效期：6個月

l 保存條件：2-8℃

l 本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷

 實驗原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）,。往預先包被人前列腺酸性磷酸酶（PAP）捕獲抗體的包被微孔中,，依次加入標本、標準品,、HRP標記的檢測抗體,，經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人前列腺酸性磷酸酶（PAP）呈正相關,。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值）,，計算樣品濃度。

人前列腺酸性磷酸酶（PAP）酶聯(lián)免疫試劑盒需要而未提供的試劑和器材

1． 37℃恒溫箱,。

2． 標準規(guī)格酶標儀,。

3． 自動洗板機。

4． 單通道或多通道可調節(jié)移液器以及其吸頭,。

5． 蒸餾水,，容量瓶等

6． 干凈的試管和Eppendof管。

注意事項

1. 從-20℃取出的試劑盒,，在4℃解凍guoye,。盒內每一瓶解凍的溶液在開啟瓶蓋之前都要輕輕搖勻,，避免解凍時出現的分層，否則會出現濃度不均一的現象,。

2. 開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘,。

3. 配制各種試劑時，切記混勻,！

4. 用戶在初次使用試劑盒時,，應將各種試劑管離心數分鐘，以便試劑集中到管底,。

5. 建議所有標準品,、樣本都做雙份檢測。

6. 要嚴格避免操作過程中酶標板干燥,。干燥會使酶標板上生物成份迅速失活,！

7. 為免交叉污染，要避免重復使用手中的吸頭和試管,。

洗板方法

手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內的液體,；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次,；將推薦的PBS或TBS洗滌緩沖液至少0.35ml注入孔內,，浸泡1-2分鐘。根據需要,，重復此過程數次,。

自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中,。

樣品的準備和保存

樣品如果不立即分析,，應分裝后冷凍保存，且避免反復凍融,。

血清——用干凈試管收集血液,，室溫凝固2小時或4℃guoye，離心1000×g 10分鐘,，收集血清,。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

細胞培養(yǎng),、組織勻漿,、體液——離心去除沉淀，立即分析或分裝后-20℃冷凍保存,。

樣品稀釋的一般原則

用戶須查閱文獻了解標本內待測因子的含量,，決定適當的稀釋倍數，以使稀釋后樣品中待測因子的濃度處于ELISA試劑盒的*檢測范圍。樣品的稀釋應有詳細記錄,。

試劑的準備和保存

A. 標準品的稀釋和使用：在使用前2小時內準備,。將凍干品管內加入1ml樣品稀釋液，*溶解后做倍比稀釋,。

8稀釋后的標準品在2小時內使用,。

B．生物素標記抗體工作液：在使用前2小時內準備。

1.  根據每孔需要0.1ml計算總的用量（實際配制時應多配制0.1-0.2ml）,。

2．按10ul生物素標記抗體稀釋液990ul的比例配制工作液。輕輕混勻,。

C．親和素-過氧化物酶復合物（ABC）工作液的準備：在使用前1小時內準備,。

1．根據每孔需要0.1ml計算總的用量（實配時應多配制0.1-0.2ml）。

2．按10ul親和素-過氧化物酶復合物（ABC）加ABC稀釋液990ul的比例配制工作液,。輕輕混勻,。

D. TMB顯色工作液的準備：在使用之前30分鐘，按TMB顯色液A 9份加 TMB顯色液B 1份的比例配制TMB顯色工作液,。

操作程序

1． 確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標板孔數目,。

2． 將倍比稀釋的標準品各0.1ml依次加入一排7孔中，1孔只加樣品稀釋液的作為對照,。處理后的標本按100ul每孔加入,。

3． 酶標板加上蓋，37℃反應90分鐘,。

4． 反應后用自動洗板機吸去酶標板內的液體,；或甩去酶標板內液體，再對著吸水紙拍幾下,。洗滌2次,。

5． 將準備好的生物素抗體工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應60分鐘,。

6． 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌3次,，每次浸泡1分鐘左右。

7． 將準備好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入,。37℃反應30分鐘,。

8． 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌5次，每次浸泡1-2分鐘左右,。

9． 按每孔0.1ml依次加入TMB顯色工作液,，37℃避光反應，反應過程中,，要經常的觀察,，當肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔差別不明顯時,，即可加入TMB終止液0.1ml/孔,。（顯色反應zui長不要超過30分鐘）,。

10． 用酶標儀在450nm測定O.D.值。

11． 根據樣品的吸光值在坐標上找出對應的濃度,。用戶也可以使用各種應用軟件來計算,。應記住由于樣品稀釋了N倍，其實際濃度應該×N,。