cANCA,人抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體酶聯(lián)免疫試劑盒原理用于體外定量檢測血清、血漿,、組織,、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中人抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（cANCA）的含量。

cANCA,人抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體酶聯(lián)免疫試劑盒原理

l 本試劑盒用于體外定量檢測血清,、血漿,、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中人抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（cANCA）的含量,。

l 有效期：6個月

l 保存條件：2-8℃

l 本試劑盒僅供體外研究使用,，不用于臨床診斷

 實驗原理

試劑盒采用間接法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被人抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（cANCA）捕獲抗原的包被微孔中,，依次加入標(biāo)本,、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,，經(jīng)過溫育并*洗滌,。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的人抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（cANCA）呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度,。

 cANCA,人抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體酶聯(lián)免疫試劑盒原理操作常見問題：

1．邊緣效應(yīng) 使用96孔板的ELISA測定中,，常發(fā)現(xiàn)有“邊緣效應(yīng)"，即外周孔顯色較中心孔深,。經(jīng)研究證實在溫育中的熱力學(xué)梯度可能是根本原因之所,。聚苯乙烯本身為不良熱導(dǎo)體，在實驗室的常規(guī)ELISA測定中,，將板從室溫(通常在25℃左右)置于37℃溫箱,，板也升溫時，在外周孔與中心孔之間可能存在一熱力學(xué)梯度,。因此使用水浴或在將反應(yīng)溶液加入至板孔中時,，將板和溶液均加熱至溫育溫度(如37℃)，就可以很容易地排除“邊緣效應(yīng)",，并且可提高測定的重復(fù)性,。

2．加樣,在現(xiàn)在的ELISA商品試劑盒中，必然有使用微量加樣器加入樣本的步驟,。注意的關(guān)鍵點是：加樣不可太快,，要避免加在孔壁上部，不可濺出和產(chǎn)生氣泡,。加樣太快,，無法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū),，易導(dǎo)致非特異吸附,。濺出會對鄰近孔產(chǎn)生污染。出現(xiàn)氣泡則反應(yīng)液界面有差異,。所以,，有時候一份標(biāo)本用相同的試劑盒這次測定為陽性，下次測定為陰性,，往往就是上述加樣及試劑的錯誤所致,。

Elisa定量測定/定性測定比較

Elisa定量測定

ELSIA操作步驟復(fù)雜，影響反應(yīng)因素較多,，特別是固相載體的包被難達(dá)到各個體之間的*,，因此在定量測定中，每批測試均須用一系列不同濃度的參考標(biāo)準(zhǔn)品在相同的條件下制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。測定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA,，標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍一般較寬,，曲線zui高點的吸光度可接近2.0，繪制時常用半對數(shù)紙,，以檢測物的濃度為橫坐標(biāo),，以吸光度為縱坐標(biāo)，將各濃度的值逐點連接,，所得曲線一般呈S形,，其頭、尾部曲線趨于平坦,，中央較呈直線的部分是的檢測區(qū)域,。

Elisa定性測定

定性測定的結(jié)果判斷是對受檢標(biāo)本中是否含有待測抗原或抗體作出"有"或"無"的簡單回答，分別用"陽性",、"陰性"表示,。"陽性"表示該標(biāo)本在該測定系統(tǒng)中有反應(yīng)。"陰性"則為無反應(yīng),。用定性判斷法也可得到半定量結(jié)果,，即用滴度來表示反應(yīng)的強度，其實質(zhì)仍是一個定性試驗,。在這種半定量測定中,，將標(biāo)本作一系列稀釋后進行試驗，呈陽性反應(yīng)的zui高稀釋度即為滴度,。根據(jù)滴度的高低,，可以判斷標(biāo)本反應(yīng)性的強弱，這比觀察不稀釋標(biāo)本呈色的深淺判斷為強陽性,、弱陽性更具定量意義,。

儲存說明：

試劑盒在4℃下存放 不要凍結(jié)。4℃保存,，有效期六個月,，客戶應(yīng)要求供應(yīng)商,，提供批次試劑盒