Occludin,人緊密連接蛋白酶聯(lián)免疫試劑盒原理用于體外定量檢測血清,、血漿,、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中人緊密連接蛋白（Occludin）的含量,。

Occludin,人緊密連接蛋白酶聯(lián)免疫試劑盒原理

l 本試劑盒用于體外定量檢測血清,、血漿、組織,、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中人緊密連接蛋白（Occludin）的含量,。

l 有效期：6個月

l 保存條件：2-8℃

l 本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷

 實(shí)驗(yàn)原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）,。往預(yù)先包被人緊密連接蛋白（Occludin）捕獲抗體的包被微孔中,，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品,、HRP標(biāo)記的檢測抗體,，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的人緊密連接蛋白（Occludin）呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

Occludin,人緊密連接蛋白酶聯(lián)免疫試劑盒原理操作流程（具體請參照說明書）

① 加抗體包被 → 4℃過夜,，洗滌三次,、拋干

② 加待檢抗原 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次,、拋干

③ 加酶標(biāo)抗體 → 37℃ 30分鐘,，洗滌三次、拋干

④ 加底物液　→ 37℃ 15分鐘,，加終止液

⑤ 用ELISA檢測儀測定OD值

常見問題

實(shí)驗(yàn)中zui可能出現(xiàn)問題       

一,、所有孔未顯色？

分析原因：      

1,、微孔加入抗體后,，洗板不*，微孔中存在游離的抗體,。          

2,、用錯試劑。          

3,、在操作中忘記加酶或抗體,。     

 解決辦法：            

1、檢查洗板器械,，比如洗板機(jī)管道是否堵塞,、洗液是否用完。          

2,、在加樣前,，要看清瓶簽。          

3,、嚴(yán)格按說明書操作步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn),，確保每步都到位。          

二,、所有孔顯色偏低,？

分析原因：    

1、微孔加入抗體后,，洗板不*,，微孔中存在游離的抗體。          

2,、洗板不干凈,。          

3、抗體污染了酶結(jié)合物等其它試劑,。          

4,、溫度沒達(dá)到要求,。          

5、每孔加入的試劑量低于說明書要求量,。      

解決辦法：     

1,、手工加蒸餾水洗板時，要避免吸頭接觸微孔,，常更換新的蒸餾水,。    

2、洗板時要確保每孔都注滿蒸餾水（約400ul）,，且至少洗板五次,。      

3、嚴(yán)格按說明書要求操作,，每次取樣要更換吸頭,。      

4、控制孵育溫度在25℃,。       

5,、加樣器吸頭安放牢固避免吸樣不足，加樣時務(wù)必將吸頭內(nèi)液體打盡,。

儲存方式

試劑盒在4℃下存放不要凍結(jié),4℃保存,，有效期六個月，客戶應(yīng)要求供應(yīng)商,，提供批次試劑盒