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請查收！您的全自動高通量蛋白純化方案已發(fā)布,！
在綠色生物制造和合成生物學(xué)等研究領(lǐng)域中,，高質(zhì)量的蛋白分離和純化是研究目的蛋白結(jié)構(gòu)和功能的重要步驟。傳統(tǒng)的分離純化方法通量低,、耗時長,、均一性差，全自動高通量蛋白純化系統(tǒng)在生命科學(xué)研究和生物制藥領(lǐng)域已開始廣泛運用,，從樣本前處理工序,，到不同類型的蛋白純化流程，可實現(xiàn)多管線自動化平行實驗,，具有穩(wěn)定的工藝流程,，可極大提高實驗效率，節(jié)約時間和人力成本,；同時還可以進行數(shù)據(jù)交互,，實現(xiàn)樣本溯源和實驗數(shù)據(jù)管理。今天小貝給大家整理了幾種常見好用的蛋白純化方案助力您的科學(xué)研究,。
磁珠捕獲特異性標(biāo)簽蛋白,，因其純化步驟精簡成熟被廣泛應(yīng)用，圖1是磁珠純化流程示意圖,。小貝為您量身定制蛋白純化全流程自動化方案：使用Biomek i系列液體工作站,，整合核酸/蛋白提取儀，實現(xiàn)高效高通量自動化蛋白純化,，極大節(jié)省實驗時間和科研精力,。
圖2 Biomek i系列液體處理工作站展示圖
Biomek i系列液體工作站配置96通道和靈活8通道加樣器,，適配各種商品化試劑盒和用戶自配試劑,，輕松實現(xiàn)試劑分裝和高通量樣本純化。同時工作站支持多設(shè)備整合,，可進行后期無限升級,，添加離心機、酶標(biāo)儀等設(shè)備助力全流程自動化實驗,。
圖3 磁珠純化方法截圖及純化結(jié)果
高通量磁珠法蛋白純化模塊可以通過結(jié)合核酸/蛋白提取儀實現(xiàn)極簡快速蛋白純化,，也可以通過自動化液體工作站結(jié)合磁力架完成,。使用該功能時僅需要通過軟件的簡易命令行即可完成，如圖3所示,，工作站機械抓手會根據(jù)純化流程將Binding Buffer,、Beads、Washing Buffer等試劑自動搬運到特定位置,，使用磁套進行磁珠轉(zhuǎn)運,，單次可以完成96個樣本純化，濃度穩(wěn)定在0.5-0.8mg/ml,，96孔板純化時間約60min,，節(jié)省槍頭成本，省時省力,。
圖4 親和層析柱蛋白純化法實驗流程
RoboColumn是一種小型色譜柱,，用于抗體,、蛋白質(zhì)、多肽等的全自動平行色譜分離,，其純化流程如圖4所示,。高通量的RoboColumn ALP 與Biomek i系列液體工作站相結(jié)合，配置Span8固定針,，可實現(xiàn)多通道自動化的平行層析實驗流程,，顯著縮短工藝開發(fā)時間；同時還可以進行數(shù)據(jù)追蹤,，實現(xiàn)樣本溯源,，減少重復(fù)工作。
圖5 RoboColumn ALP模塊結(jié)構(gòu)及Span8固定針示意圖
W1：廢液槽；B1：收集板載架；C1：柱載架
Biomek液體工作站可以實現(xiàn)臺面整合RoboColumn ALP模塊,，通過軟件流程式編輯方法,，控制ALP板位自動位移，實現(xiàn)液體收集,，輕松完成蛋白純化,，圖6展示了軟件控制ALP板位收集液體的方法以及RoboColumn純化結(jié)果，實驗中1.56mg蛋白上樣,，經(jīng)0.1M Gly-HCl(pH2.7)洗脫回收得到蛋白含量1.31mg,，純化得率達到84%，8通道操作時間約為80min,。
圖6 調(diào)用RoboColumn方法界面及純化結(jié)果展示
圖7 PhyTip法自動化純化關(guān)鍵流程
PhyTip為槍頭式分散固相親和色譜柱，采用槍頭式裝置,，純化樹脂被填充于槍頭頂端,，由自動化液體處理工作站加載PhyTip，可以實現(xiàn)單通道到96通道靈活樣品數(shù)純化,，其純化流程如圖7所示,，可對微克級到毫克級的蛋白進行純化。
圖8 PhyTip實物圖、PhyTip純化方法及結(jié)果展示圖
Biomek液體工作站與槍頭式純化色譜柱相結(jié)合,，利用工作站加載PhyTip讓純化流程變得如移液流程一樣簡單,！如圖8所示，加樣器加載PhyTip,，分別在平衡液,、蛋白樣品、洗雜液和洗脫液中混勻即可完成高通量蛋白純化,，單次可處理96個樣品,，收集10mL菌液使用PhyTip(40uL填料)，純化后經(jīng)BCA蛋白定量測定蛋白含量穩(wěn)定在400ug左右,，優(yōu)于手工對照實驗340ug的結(jié)果,，96孔板操作時間約為90min。
小 結(jié)
