酶聯(lián)免疫法磺胺多殘留試劑盒使用說明;本試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測組織、血清、蜂蜜,、牛奶、尿液,、雞蛋等樣本中的磺胺類藥物（Sulfonamides，SAs）,，試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物,、抗體,、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成,。

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酶聯(lián)免疫法磺胺多殘留試劑盒使用說明

廣州健侖生物科技有限公司

 

酶聯(lián)免疫法磺胺多殘留試劑盒使用說明(檢測樣本步驟）

組織樣本（低檢測限）處理方法

1）稱2.0±0.05g 均質(zhì)組織樣本于離心管中；加入8ml 0.02M PB緩沖液,，震蕩2min，4000r/min以上離心10min,；

2）取50µl液體用于分析。

 樣本稀釋倍數(shù): 5  檢測下限：2.5ppb  

血清樣本處理方法

1）將血樣本于室溫放置30min,，于4000r/min以上離心10min，分離出血清或過濾血清,；

2）取1ml血清,，加入3ml 0.02 M PB緩沖液混合,，混合30s；

3）取50µl用于分析,。  

 樣本稀釋倍數(shù)：4  檢測下限：2ppb　　

 蜂蜜樣本處理方法

1）稱取1±0.05g蜂蜜樣本于50ml離心管中,，加入1ml 0.5M鹽酸置于37℃環(huán)境中30min,；

2）加入2.5ml 0.2M 氫氧化鈉 (將PH值調(diào)至5左右)再加入4ml乙酸乙脂振蕩5min,，4000r/min以上室溫離心10min；

3）取2ml上層液體于50-60℃下氮氣吹干,，加0.5ml 已稀釋好的復(fù)溶液復(fù)溶，混合30s,；

4）取50µl用于分析,。  

樣本稀釋倍數(shù)：1  檢測下限：0.5ppb

尿樣本處理方法

1）用3ml 0.02 M PB緩沖液與1ml經(jīng)離心后的清亮尿樣本混合,，混合30s；

2）取50µl液體用于分析,。  

樣本稀釋倍數(shù): 4  檢測下限：2ppb 

5.3.6牛奶樣本處理方法

1）將牛奶樣本用0.02 M PB緩沖液20倍稀釋（如20µl牛奶+380µl 0.02  M PB緩沖液），混合30s,；

2）取50µl用于分析,。

樣本稀釋倍數(shù)：20  檢測下限：10ppb   

水樣處理方法

1）取水樣200ul加入200ul 2X復(fù)溶液,，混合30s；

2）取50µl用于分析,。

樣本稀釋倍數(shù)：2  檢測下限：1ppb   

雞蛋樣本處理方法

1）用均質(zhì)器均質(zhì)雞蛋樣本，使蛋清和蛋黃充分混合,；

2）稱取2.0±0.05g均質(zhì)后的雞蛋樣本（蛋粉1g加3ml去離子水混勻后取2ml相當(dāng)于2g鮮雞蛋）至50ml離心管中,，加入8ml乙腈,，立即用振蕩器振蕩10min，室溫4000r/min以上離心5min,；

3）移取1ml上清液至10ml潔凈干燥玻璃試管中于，在50-60℃氮氣或空氣吹干,；

4）加入1ml正己烷,，用渦旋儀渦動30s溶解干燥的殘留物,，再加入1ml復(fù)溶工作液,，用渦旋儀渦動1min，室溫4000r/min以上離心5min,；

5）去上層有機相，取下層水相50ul用于分析,。

樣本稀釋倍數(shù): 4  檢測下限：2ppb

酶聯(lián)免疫試驗步驟

 將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出,，置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時可能會有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解,，每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架,，將不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃,。

6.1 編    號：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號，每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置,。

6.2 加樣反應(yīng)：加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50µl/孔到各自的微孔中,，然后加酶標(biāo)記物50µl/孔，再加入50µl/孔的抗體工作液,，用蓋板膜封板,，輕輕振蕩5秒混勻,，25℃反應(yīng)45分鐘。

6.3 洗    滌：小心揭開蓋板膜,，將孔內(nèi)液體甩干,，用工作洗滌液250µl/孔充分洗滌5次,，每次間隔30秒，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）,。

6.4 顯    色：每孔加入底物液A 50µl，再加底物液B 50µl,，輕輕振蕩5秒混勻,，25℃避光顯色15分鐘（若藍(lán)色過淺，可適當(dāng)延長反應(yīng)時間）,。

6.5 終    止：每孔加入終止液50µl，輕輕振蕩混勻,，終止反應(yīng)。

6.6 測吸光值：用酶標(biāo)儀于450nm處測定每孔吸光度值（建議用雙波長450/630nm）,。測定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。

結(jié)果分析

7.1 百分吸光率的計算

    標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以*個標(biāo)準(zhǔn)液（0ppb）的吸光度值,，再乘以100%,，即

百分吸光度值（%）＝	A	×100%
	A0

A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

7.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計算

以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo)，對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度（ppb）的對數(shù)為橫坐標(biāo),，繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對數(shù)曲線圖,。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測物的實際濃度,。 若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算，更便于大量樣本的準(zhǔn)確,、快速分析,。

注意事項

8.1 室溫低于25℃或試劑及樣本沒有回到室溫（25℃）會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。

8.2 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,，則會出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象,。所以洗板拍干后應(yīng)立即進行下一步操作,。

8.3 混合要均勻，洗板要*,，在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的*性,。

8.4 在所有孵育過程中,，用蓋板膜封住微孔板，避免光線照射,。

8.5 不要使用過了有效期的試劑盒,，不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑,。

8.6 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之,。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個單位（A450nm< 0.5 ）時，表示試劑可能變質(zhì),。

8.7 反應(yīng)終止液有腐蝕性,，避免接觸皮膚,。