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嬰幼兒食品和乳品中脂肪酸的測(cè)定
閱讀：981 發(fā)布時(shí)間：2011-7-12
嬰幼兒食品和乳品中脂肪酸的測(cè)
（乙酰氯—甲醇甲酯化法）
一,、原理
乙酰氯與甲醇反應(yīng)得到的鹽酸—甲醇使試樣中的脂肪和游離脂肪酸甲酯化,，用甲苯提取后,，經(jīng)氣相色譜儀分離檢測(cè)，外標(biāo)法定量,。
本方法依據(jù)《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)GB 5413.27—2010嬰幼兒食品和乳品中脂肪酸的測(cè)定》方法中規(guī)定,。
二、儀器和設(shè)備
1.萬分之一電子天平
2.恒溫?zé)崴〔?/span>
3.離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥5000 轉(zhuǎn)/分鐘,，離心管：50mL
4.GC-L6氣相色譜儀,，帶FID 檢測(cè)器，毛細(xì)管分流/不分流進(jìn)樣及尾吹系統(tǒng)
5.冷凍干燥儀
6.LF-12氮吹儀
7. PC2560毛細(xì)管柱（100*0.25*0.20）
三,、試劑：
1.無水碳酸鈉
2.甲苯
3.乙酰氯
4.乙酰氯甲醇溶液
5.碳酸鈉溶液
6.脂肪酸甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥99 %
四,、分析步驟
1.試樣處理
試樣含水量大于5%時(shí)，冷凍干燥至含水量小于5%,。
稱取試樣0.5 g（到0.1 mg）于15 mL 干燥螺口玻璃管中,，加入5.0mL甲苯。
稱取無水奶油試樣0.2g（到0.1mg）于15mL干燥螺口玻璃管中,，加入5.0mL甲苯,。
2.甲酯化提取
2.1試樣測(cè)定液的制備
在試樣中加入10%乙酰氯甲醇溶液6.0mL，充氮?dú)夂?，旋緊螺旋蓋,，振蕩混合后于80℃±1℃水浴中放置2h，期間每隔20min取出振搖一次,，水浴后取出冷卻至室溫,。將反應(yīng)后的樣液轉(zhuǎn)移至50mL離心管中，分別用3.0mL碳酸鈉溶液清洗玻璃管三次,，合并碳酸鈉溶液于50mL離心管中,，混勻,，5000 轉(zhuǎn)/分鐘離心約5min。取上清液作為試液,，氣相色譜儀測(cè)定,。
2.2標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定液的制備
準(zhǔn)確吸取脂肪酸甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)工作液0.5mL于15mL螺口玻璃管中，加入4.5mL甲苯,，其他操作步驟同2.1,。
五、色譜參考條件
色譜柱：PC2560100m×0.25mm,，0.20um
氣源：氮?dú)猓?9.999%）,、氫氣（99.999%）、空氣（99.999%）
載氣流速：1.0mL/min
進(jìn)樣口溫度：260℃
分流比：30：1
檢測(cè)器溫度：280℃
柱溫箱溫度：初始溫度140℃,，保持5min,，以4℃/min升溫至240℃，保持15min
進(jìn)樣量：1.0μL
六,、試樣溶液的測(cè)定
分別準(zhǔn)確吸取1.0μL脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定液及試樣測(cè)定液注入色譜儀,，平行測(cè)定次數(shù)不少于兩次，以色譜峰峰面積定量,。
七,、分析結(jié)果的表述
1.試樣中各脂肪酸的含量的計(jì)算
試樣中各脂肪酸的含量按公式（1）計(jì)算：
式中：
X i—— 試樣中各脂肪酸的含量，單位為毫克每百克（mg/100 g）,；
Asi—— 試樣測(cè)定液中各脂肪酸的峰面積,；
mstdi——在標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定液的制備（6.2.2）中吸取的脂肪酸甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)工作液中所含有的標(biāo)準(zhǔn)品的
質(zhì)量, 單位為毫克（mg）,；
Fj——各脂肪酸甘油三酯轉(zhuǎn)化為脂肪酸的換算系數(shù),，參見附錄A 中的表A.1；
Astdi ——標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定液中各脂肪酸的峰面積,；
m ——試樣的稱樣質(zhì)量,，單位為克（g）。
以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示,，結(jié)果保留三位有效數(shù)字,。
2.試樣中總脂肪酸的含量計(jì)算
試樣中總脂肪酸的含量按公式（2）計(jì)算：
式中：
XTotal FA——試樣中總脂肪酸的含量，單位為毫克每百克（mg/100 g）,；
Xi ——試樣中各脂肪酸的含量,，單位為毫克每百克（mg/100 g）。
以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示,，結(jié)果保留三位有效數(shù)字,。
3.試樣中某個(gè)脂肪酸占總脂肪酸的百分比（%）的計(jì)算
試樣中某個(gè)脂肪酸占總脂肪酸的百分比（%）Y 按公式（3）計(jì)算：