液相色譜使用中的常見(jiàn)細(xì)節(jié)問(wèn)題
流動(dòng)相不過(guò)濾。
因?yàn)閴m?；蚱渌魏坞s質(zhì)微粒都會(huì)磨損柱塞,、密封環(huán)、缸體和單向閥,，因此應(yīng)預(yù)先除去流動(dòng)相中的任何固體微粒,。流動(dòng)相最好在玻璃容器內(nèi)蒸餾，而常用的方法是濾過(guò),，可采用Millipore濾膜（0.2μm或0.45μm）等濾器,。泵的入口都應(yīng)連接砂濾棒（或片）。輸液泵的濾器應(yīng)經(jīng)常清洗或更換,。
使用后沒(méi)有及時(shí)清洗泵
流動(dòng)相不應(yīng)含有任何腐蝕性物質(zhì),，含有緩沖液的流動(dòng)相不應(yīng)保留在泵內(nèi)，尤其是在停泵過(guò)夜或更長(zhǎng)時(shí)間的情況下,。如果將含緩沖液的流動(dòng)相留在泵內(nèi),，由于蒸發(fā)或泄漏，甚至只是由于溶液的靜置，就可能析出鹽的微細(xì)晶體,，這些晶體將和上述固體微粒一樣損壞密封環(huán)和柱塞等,。因此，必須泵入純水將泵充分清洗后,，再換成適合于色譜柱保存和有利于泵維護(hù)的溶劑（對(duì)于反相鍵合硅膠固定相,，可以是甲醇或甲醇-水）。
流動(dòng)相走空
泵工作時(shí)要留心防止溶劑瓶?jī)?nèi)的流動(dòng)相被用完,，否則空泵運(yùn)轉(zhuǎn)也會(huì)磨損柱塞,、缸體或密封環(huán)，最終產(chǎn)生漏液,。
沒(méi)有流動(dòng)相流出,，又無(wú)壓力指示怎么辦？
可能是泵內(nèi)有大量氣體,，這時(shí)可打開(kāi)泄壓閥,，使泵在較大流量（如5ml/min）下運(yùn)轉(zhuǎn)，將氣泡排盡,，也可用一個(gè)50ml針筒在泵出口處幫助抽出氣體,。另一個(gè)可能原因是密封環(huán)磨損，需更換,。
壓力和流量不穩(wěn)了？
原因可能是氣泡,，需要排除,；或者是單向閥內(nèi)有異物，可卸下單向閥,，浸入丙酮內(nèi)超聲清洗,。有時(shí)可能是砂濾棒內(nèi)有氣泡，或被鹽的微細(xì)晶?；蜃躺奈⑸锊糠侄氯?，這時(shí)，可卸下砂濾棒浸入流動(dòng)相內(nèi)超聲除氣泡,，或?qū)⑸盀V棒浸入稀酸（如4mol/L硝酸）內(nèi)迅速除去微生物,，或?qū)Ⅺ}溶解，再立即清洗,。
壓力為啥過(guò)高或過(guò)低,？
可能是是管路被堵塞，需要清除和清洗,。壓力降低的原因則可能是管路有泄漏,。檢查堵塞或泄漏時(shí)應(yīng)逐段進(jìn)行。
在進(jìn)行梯度洗脫時(shí)，由于多種溶劑混合,，而且組成不斷變化,，因此帶來(lái)一些特殊問(wèn)題，必須充分重視：
PS：（在液相色譜中對(duì)組分復(fù)雜的樣品采用梯度洗脫的方法,。在同一個(gè)分析周期中,，按一定程序不斷改變流動(dòng)相的濃度配比，稱為梯度洗脫,。從而可以使一個(gè)復(fù)雜樣品中的性質(zhì)差異較大的組分能按各自適宜的容量因子k達(dá)到良好的分離目的,。
梯度洗脫的優(yōu)點(diǎn)：1.縮短分析周期；2.提高分離能力,；3.峰型得到改善,，很少拖尾；4.增加靈敏度,。但有時(shí)引起基線漂移,。）
梯度洗脫的流動(dòng)相選擇不當(dāng)
要注意溶劑的互溶性，不相混溶的溶劑不能用作梯度洗脫的流動(dòng)相,。有些溶劑在一定比例內(nèi)混溶,，超出范圍后就不互溶，使用時(shí)更要引起注意,。當(dāng)有機(jī)溶劑和緩沖液混合時(shí),，還可能析出鹽的晶體，尤其使用磷酸鹽時(shí)需特別小心,。
忽略的空白梯度洗脫
梯度洗脫所用的溶劑純度要求更高,，以保證良好的重現(xiàn)性。進(jìn)行樣品分析前必須進(jìn)行空白梯度洗脫,，以辨認(rèn)溶劑雜質(zhì)峰,，因?yàn)槿跞軇┲械碾s質(zhì)富集在色譜柱頭后會(huì)被強(qiáng)溶劑洗脫下來(lái)。用于梯度洗脫的溶劑需徹底脫氣,，以防止混合時(shí)產(chǎn)生氣泡,。
忽略了溶劑混合所帶來(lái)的粘度變化
混合溶劑的粘度常隨組成而變化，因而在梯度洗脫時(shí)常出現(xiàn)壓力的變化,。例如甲醇和水粘度都較小,，當(dāng)二者以相近比例混合時(shí)粘度增大很多，此時(shí)的柱壓大約是甲醇或水為流動(dòng)相時(shí)的兩倍,。因此要注意防止梯度洗脫過(guò)程中壓力超過(guò)輸液泵或色譜柱能承受的最大壓力,。
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