日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

您好, 歡迎來到化工儀器網(wǎng)

| 注冊| 產(chǎn)品展廳| 收藏該商鋪

400-639-1125

news

首頁   >>   公司動態(tài)   >>   固相萃取—液相色譜法測定大豆油中維生素K1含量

北京樂氏聯(lián)創(chuàng)科技有限公司

立即詢價

您提交后,,專屬客服將第一時間為您服務(wù)

固相萃取—液相色譜法測定大豆油中維生素K1含量

閱讀:3832      發(fā)布時間:2016-7-12
分享:

維生素K為人體必需的脂溶性維生素,,其中人體維生素K1主要來源于綠葉蔬菜(如菠菜、甘藍(lán),、萵苣等),、大豆及其制品。隨著對維生素K生理功能研究的不斷深入,,發(fā)現(xiàn)其具有促進(jìn)凝血,、參與骨骼代謝、維持心血管健康等諸多功能,。

近年來,,國內(nèi)外研究人員對食物中維生素K1分析測定日益關(guān)注。在食品中維生素K1檢測方法中,,液相色譜法(HPLC)因具有靈敏,、精密度高、分離效果好,、樣品處理簡單,、分析速度快等優(yōu)點而受到廣泛應(yīng)用。我國已制定蔬菜和乳制品中維生素K1含量的測定方法,,但由于缺乏良好的提取和分析方法,,國內(nèi)尚無測定大豆油中維生素K1的標(biāo)準(zhǔn)方法,有關(guān)大豆及大豆制品中維生素K1的研究報道也較少,。近年來,,在色譜分析樣品前處理中,固相萃?。⊿olid Phase Extraction,, SPE)成為重要的方法之一,越來越多的國內(nèi)研究者使用SPE進(jìn)行色譜分析食品樣品的前處理,。測定大豆油中維生素K1含量的關(guān)鍵是如何進(jìn)行分離提取,,去除各種干擾物質(zhì)并避免維生素K1破壞。本研究選用SPE硅膠柱對樣品進(jìn)行凈化處理,,分離提取大豆油中的維生素K1,,運用靈敏、的液相色譜法測定樣品中維生素K1,。

1 材料與方法

1.1 儀器及試劑

UV1201紫外-可見檢測器,、AS1201自動進(jìn)樣器、RO1201溶劑管理器,、P1201高壓恒流泵,、EC2006色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)(大連依利特公司);Laborota 4001旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,;SHZ-D(Ⅲ)循環(huán)水式真空泵,;Eppendorf AG5305隔膜真空泵,;SC-2546型低速離心機(jī);G-560E漩渦振蕩器,;SPE硅膠柱(6 mL,,1 g)。

正己烷(色譜純),、甲醇(色譜純),、維生素K1標(biāo)準(zhǔn)品(純度>99%)購自美國Sigma公司;yi醚(分析純),、正己烷(分析純)購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司,。

1.2 測定方法

1.2.1 色譜條件 色譜柱:安捷倫C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μL),;柱溫:30 ℃,;流動相:V(甲醇)︰V(正己烷)=98︰2;檢測波長:248 nm,;進(jìn)樣量:20 μL,;流速:1.5 mL/min。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 稱取維生素K1標(biāo)準(zhǔn)品0.1 g(至0.001 g),,用正己烷溶解并定容于100 mL棕色容量瓶中搖勻,,得1 mg/mL維生素K1標(biāo)準(zhǔn)儲備液。

1.2.3 樣品提取與凈化 所有操作在避光室內(nèi)微弱黃光燈下進(jìn)行,。

取0.1 g油樣(至0.001 g)溶于5 mL正己烷,劇烈震蕩5 min,,離心5 min(3 000 r/min),,取4.5 mL上清液,待凈化,。

將SPE硅膠柱(6 mL,,1 g,Agilent)分別用8 mL正己烷︰yi醚=97︰3和8 mL正己烷將SPE柱活化后,,提取液以1.0 mL/min流速過柱,;用8 mL正己烷以1.0 mL/min流速淋洗小柱,后分5次加入20 mL正己烷︰yi醚=97︰3溶液洗脫,,收集洗脫液后濃縮吹干,;用5 mL正己烷溶解殘渣,轉(zhuǎn)移至試管低溫濃縮30 min,,加1 mL正己烷定容離心5 min,,經(jīng)0.45 μm濾膜過濾后上機(jī)分析。

1.2.4 測定方法 吸取上述樣品溶液與標(biāo)準(zhǔn)品溶液分別注入液相色譜儀,,測得色譜峰面積,,以外標(biāo)法計算樣品中的維生素K1含量,。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品預(yù)處理方法優(yōu)化

脂溶性維生素K1在大豆油中含量豐富,如何避免維生素K1破壞并去除干擾物質(zhì)是分離提取的關(guān)鍵,。GB 5413.10-2010將嬰幼兒乳制品中的脂肪酶解皂化后提取維生素K1,,但維生素K1遇堿易分解,皂化處理使測定結(jié)果降低,。趙丹霞等采用溶劑萃取提取植物油中的維生素K1,,方法簡單,但是樣品不經(jīng)凈化或凈化不*,,共同洗脫下的干擾物質(zhì)如維生素A,、維生素D、維生素E會影響HPLC的分離效果,。固相萃取法比溶劑萃取法使用的溶劑更少,,操作過程也相對簡單,提取和凈化同步完成,。GB/T5009.158-2003測定蔬菜中維生素K1選用氧化鋁做色譜柱,,避免使用氧化鋁可能造成的維生素K1分解現(xiàn)象。對樣品進(jìn)行凈化處理前要先用失活的磷酸鹽處理氧化鋁,,前處理時間長且處理過程復(fù)雜,。Kamao等使用SPE硅膠柱凈化處理油脂類食品,再進(jìn)行HPLC分析,,SPE硅膠柱體積小,,對樣品的富集和凈化效果好。因此,,對方法進(jìn)行改進(jìn)后采用硅膠柱固相萃取法凈化大豆油樣品,,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品提取與凈化后的HPLC分析圖譜分別見圖1和圖2。

由圖1和圖2可以看出,,處理后的樣品分析圖譜基線穩(wěn)定,,保留時間附近的雜質(zhì)被有效去除,干擾較少,。同時,,對維生素K1標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行回收試驗驗證,結(jié)果顯示回收率較高,,詳見表1,。

2.2 樣本量大小確定及加樣回收率試驗

本研究采用SPE硅膠柱(6 mL,1 g,,Agilent)柱內(nèi)硅膠填料容量較小,。由于大豆油取樣量過大,在載樣過程中可能有部分維生素K1不能被吸附,直接影響層析效果,,造成回收率偏低,。參考上樣體積對維生素K1回收的影響,通過比較不同的上樣體積,,終確定SPE硅膠柱的佳上樣質(zhì)量為0.1 g,。此時分離效果較好,樣品中維生素K1的回收率也較好,,結(jié)果可靠(詳見表2),。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

吸取維生素K1標(biāo)準(zhǔn)儲備液100 μL,用分析純正己烷溶解定容至5 mL,,混勻,,得到濃度為20 μg/mL的稀釋液。再分取一定體積用正己烷稀釋溶解定容,,分別配制成含維生素K1 0.125,,0.25,0.50,,2.50,,5.00,

10.00 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)液,,上機(jī)測定,,以維生素K1標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)、以峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,,結(jié)果見圖3,。結(jié)果表明,維生素K1在0~10 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(R2>0.999),。

2.4 低檢測限

將標(biāo)準(zhǔn)工作液依次稀釋,,以10倍儀器響應(yīng)值標(biāo)準(zhǔn)偏差與標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率的比值計算得到儀器的檢測限為0.062 5 μg/mL。

2.5 重復(fù)性測定

在較短的間隔時間內(nèi),,取同一份維生素K1標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行6次測定,結(jié)果見表3,。此次試驗的變異系數(shù)為3%,,由此可見試驗重復(fù)性較好。

2.6 溶液穩(wěn)定性測定

取同一個待測樣品分別放置在避光和室內(nèi)室溫暗處(22~25 ℃)0,,2,,4,6,,8 h,,取待測樣品溶液20 μL在同一色譜條件下進(jìn)行測定,結(jié)果見表4,。結(jié)果顯示,,測定樣品中維生素K1含量的穩(wěn)定性較好,。

2.7 大豆油樣品中維生素K1含量測定

測定29種大豆油中的生素K1平均含量,結(jié)果顯示未檢出至215 μg/100 g,,平均140.92±33.99 μg/100 g,。由于地理環(huán)境、植物種類存在差異,,因此需要對測定結(jié)果做進(jìn)一步研究,。未檢出的樣品中可能不含維生素K1或含量較低,未達(dá)到本方法的低檢出限,。

3 結(jié)論與討論

本方法建立了固相萃取-液相色譜法測定大豆油中維生素K1的方法,,改變了樣品的前處理方法,避免使用皂化處理,,減少了維生素K1的損失,。利用固相萃取方法凈化處理樣品,能有效地去除樣品中的干擾物質(zhì),。采用富集和凈化效果好的小體積硅膠柱,,所獲結(jié)果可靠、重復(fù)性良好,,適用于測定不同種類的大豆油中維生素K1的含量,。

產(chǎn)品展示

會員登錄

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

標(biāo)簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)

常用:

提示

您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復(fù)您~
在線留言