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107次規(guī)格:100 管/48 樣
土壤脫氫酶 (Soil dehydrogenase, sDHA) 試劑盒說明書
微量法
注意:正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定,。
測定意義:
土壤脫氫酶(Soil dehydrogenase, sDHA)的活性可以反映土壤體系內(nèi)活性微生物量以及其對 有機物的降解活性,可以作為土壤微生物的降解性能指標,。
測定原理:
氫受體 2, 3, 5 - 氯化三苯基四氮唑 (2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC) 在細胞呼 吸過程中接受氫以后,,被還原為三苯基甲鐟 (Triphenyl Formazone, TF),TF 呈現(xiàn)紅色,,在波 長 485nm 處有最大吸收峰,,采用分光光度法于 485nm測定其吸光值,即得土壤脫氫酶活性。
自備實驗儀器及用品:
篩子,、天平,、恒溫培養(yǎng)箱或水浴鍋、低溫離心機,、可見分光光度計/酶標儀,、微量石英比 色皿/96 孔板、冰,、蒸餾水,、丙酮 (不允許快遞,請用戶自備),。
試劑的組成和配制:
試劑一:粉劑×1 瓶,,使用前加 5mL 水溶解,4℃避光保存 (盡量現(xiàn)配現(xiàn)用),。 試劑二:液體 20mL×1 瓶,,4℃保存。
試劑三:丙酮,, 自備,。
樣品處理:
1. 土壤樣品:準確稱取過 40 目篩的新鮮土壤樣品約 0. 1g(以保證 TTC 與土壤顆粒充分接觸)。
2. 污泥樣品:污泥用蒸餾水洗滌,,10000g ,,25℃ ,離心 10min ,,棄上清,,反復 3-4 次。 測定步驟和操作表:
1 ,、分光光度計/酶標儀預熱 0min ,,調(diào)節(jié)波長至 485nm。
2 ,、操作表
對照管測定管
樣品 (g)0.050.05
試劑一 (mL)0.1
試劑二 (mL)0.20.1
置于 EP 管中,,充分混勻,37℃ ,,暗培養(yǎng) 6h ,,取出后立即冰浴 5min
試劑三 (mL)0.10.1
反復震蕩數(shù)次,37℃保溫 10min ,,10000g ,,4℃ ,離心 5min ,,取 200μL 上清于微量石英比色 皿/96 孔板,,對照管調(diào)零,,測定 A 485 。
脫氫酶活力計算:
酶活單位定義:
在 37℃時,,每克樣品每小時使反應(yīng)體系 OD 值每增加 0.01 為一個酶活單位,。 計算公式:脫氫酶活性 (U/g) =A 485 ÷0.01÷T÷W= 16.67×A 485 ÷W
T :培養(yǎng)時間,h,;W:樣品質(zhì)量,,g
注意事項:
1. 配制好的試劑一避光保存于 4℃ ,最好在一周內(nèi)使用,,若出現(xiàn)紅色,,則不能使用。
2. 試劑三易揮發(fā),,有毒,,為了您的健康,請穿實驗服,,戴口罩,,戴乳膠手套操作。
3. 反應(yīng)完成后立即冰浴以終止反應(yīng),,并去除干凈殘留的反應(yīng)液,。
4. 如果測定出來的吸光值較大,減少樣品用量再進行測定,。
5. 試劑盒 2-8℃保存。
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