規(guī)格：100 管/48 樣

土壤脫氫酶 (Soil dehydrogenase, sDHA) 試劑盒說明書

微量法

注意：正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定,。

測定意義：

土壤脫氫酶(Soil dehydrogenase, sDHA)的活性可以反映土壤體系內(nèi)活性微生物量以及其對 有機(jī)物的降解活性,，可以作為土壤微生物的降解性能指標(biāo)。

測定原理：

氫受體 2, 3, 5 -  氯化三苯基四氮唑 (2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC) 在細(xì)胞呼 吸過程中接受氫以后,，被還原為三苯基甲鐟 (Triphenyl Formazone, TF),，TF  呈現(xiàn)紅色，在波 長 485nm 處有最大吸收峰,，采用分光光度法于 485nm測定其吸光值，即得土壤脫氫酶活性,。

自備實(shí)驗(yàn)儀器及用品：

篩子,、天平、恒溫培養(yǎng)箱或水浴鍋,、低溫離心機(jī),、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比 色皿/96  孔板,、冰,、蒸餾水、丙酮 (不允許快遞,，請用戶自備),。

試劑的組成和配制：

試劑一：粉劑×1  瓶,，使用前加 5mL  水溶解，4℃避光保存 (盡量現(xiàn)配現(xiàn)用),。 試劑二：液體 20mL×1  瓶,，4℃保存。

試劑三：丙酮,， 自備,。

樣品處理：

1.  土壤樣品：準(zhǔn)確稱取過 40  目篩的新鮮土壤樣品約 0. 1g(以保證 TTC 與土壤顆粒充分接觸)。

2.  污泥樣品：污泥用蒸餾水洗滌,，10000g ,，25℃ ，離心 10min ,，棄上清,，反復(fù) 3-4 次。 測定步驟和操作表：

1 ,、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 0min ,，調(diào)節(jié)波長至 485nm。

2 ,、操作表

對照管測定管

樣品 (g)0.050.05

試劑一 (mL)0.1

試劑二 (mL)0.20.1

置于 EP  管中,，充分混勻，37℃ ,，暗培養(yǎng) 6h ,，取出后立即冰浴 5min

試劑三 (mL)0.10.1

反復(fù)震蕩數(shù)次，37℃保溫 10min ,，10000g ,，4℃ ，離心 5min ,，取 200μL  上清于微量石英比色 皿/96  孔板,，對照管調(diào)零，測定 A 485  ,。

脫氫酶活力計(jì)算：

酶活單位定義：

在 37℃時,，每克樣品每小時使反應(yīng)體系 OD  值每增加 0.01 為一個酶活單位。 計(jì)算公式：脫氫酶活性 (U/g) =A 485 ÷0.01÷T÷W= 16.67×A 485 ÷W

T ：培養(yǎng)時間,，h,；W：樣品質(zhì)量，g

注意事項(xiàng)：

1.  配制好的試劑一避光保存于 4℃ ,，最好在一周內(nèi)使用,，若出現(xiàn)紅色，則不能使用,。

2.  試劑三易揮發(fā),，有毒,，為了您的健康，請穿實(shí)驗(yàn)服,，戴口罩,，戴乳膠手套操作。

3.  反應(yīng)完成后立即冰浴以終止反應(yīng),，并去除干凈殘留的反應(yīng)液,。

4.  如果測定出來的吸光值較大，減少樣品用量再進(jìn)行測定,。

5.  試劑盒 2-8℃保存,。

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