樣品去鹽技術(shù)

在免疫酶技術(shù)中，抗原,、抗體,、酶及酶標(biāo)記抗體（或抗原）在分離與純化過(guò)程中,，常常會(huì)碰到去鹽這一實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié),。經(jīng)過(guò)去鹽,，蛋白質(zhì)溶液中不必要的無(wú)機(jī)鹽分子得以去除,，從而使蛋白進(jìn)一步純化與穩(wěn)定,。常用的去鹽技術(shù)如下：

1．透析

適用于體積不太大的蛋白質(zhì)溶液,，簡(jiǎn)單方便,，效果理想但費(fèi)時(shí),。

2.凝膠過(guò)濾

適用于體積中等的蛋白質(zhì)溶液，簡(jiǎn)便快速,，效果理想,，但去鹽后的蛋白質(zhì)溶液體積增大較多。

3.超濾

適用于體積較大的蛋白質(zhì)溶液,，去鹽速度快,，同時(shí)具有濃縮作用，但由于膜吸附作用,，樣品丟失較多,。

4.透析

實(shí)驗(yàn)室常用的去鹽方法是透析法。

在透析法中所使用的透析袋,，是一種斗透膜,。半透膜具有使小分子或離子透過(guò)，而蛋白質(zhì)分子不能通過(guò)的特性,。將蛋白質(zhì)溶液裝入透析袋內(nèi),，浸泡于蒸餾水中，由于膜內(nèi)外可擴(kuò)散離子濃度的差別,，使蛋白質(zhì)溶液中的無(wú)機(jī)鹽分子向膜外蒸餾水中擴(kuò)散,。如果經(jīng)常更換蒸餾水，則可將蛋白質(zhì)溶液中的鹽類分子全部除去,，這就是半透膜的去鹽透析原理,。假若膜外不是蒸餾水而是緩沖液，可以經(jīng)過(guò)膜內(nèi)外離子的相互擴(kuò)散,，改變蛋白質(zhì)溶液的無(wú)機(jī)鹽成分,，這就是半透膜的平衡透析原理。在離子交換層析前經(jīng)常進(jìn)行平衡透析處理,。

半透膜透析去鹽過(guò)程如下：

（1）               依據(jù)樣品量的多少,，剪取一段半透膜，浸在蒸餾水中一段時(shí)間,，然后再用蒸餾水沖洗,。

（2）               使用時(shí),，將半透膜一端折疊，封閉使之成底端,，并用滴管加入蒸餾水檢查是否漏水,。

（3）               在1000－2000ml大燒杯中注滿水，燒杯口上擱置一玻棒,。

（4）               倒盡膜內(nèi)蒸餾水,，然后加入蛋白質(zhì)樣品液（不能裝得太滿，以免脹裂）,，用橡皮筋扎牢管的上端,，懸掛在玻璃棒中央，放入蒸餾水燒杯中,。

（5）               將蒸餾水燒杯置于4℃冰箱中透析2－3天,，每天換水3次以上。如果置于磁力攪拌器上攪拌透析,，則去鹽效果更好,。要經(jīng)常檢查透析袋的扎口是否緊密，以防漏液,。

（6）               按不同樣品要求去除不同無(wú)機(jī)鹽離子,，可用特定的指示劑測(cè)定zui后透析用過(guò)的蒸餾水中是否還含有這種離子。

5．討論

（1）蛋白質(zhì)樣品的濃度應(yīng)透析后測(cè)定,，因?yàn)榻?jīng)過(guò)半透膜透析,，膜內(nèi)滲透壓高于膜外，水分子會(huì)進(jìn)入膜內(nèi),，所以在去鹽以后,，蛋白質(zhì)溶液體積會(huì)相應(yīng)增大。

（2）有時(shí)會(huì)在透析袋內(nèi)發(fā)生沉淀,，一般而言,，通過(guò)離心去除并不影響蛋白質(zhì)樣品的性質(zhì)。

 （3）透析袋在生理鹽水中浸洗后,，還可繼續(xù)使用,。